植物螯合肽及植物螯合肽合成酶在植物鎘耐性和積累中的作用機制研究.pdf

1、本研究以草坪草匍匐翦股穎和高羊茅及模式植物煙草作為材料，探討(1)PC在不同Cd耐性和積累水平草坪草品種中的作用；(2)植物螯合肽合成酶表達對PC生物合成、Cd耐性及積累的影響；(3)能否通過轉(zhuǎn)基因途徑提高PC水平及重金屬耐性和積累能力。 一、草坪草匍匐翦股穎和高羊茅鎘耐性和積累機制研究:　　以幼苗和懸浮細胞為材料，對匍匐翦股穎和高羊茅兩種草坪草在Cd處理條件下的耐性和積累水平進行了比較，觀察到兩者在生理和生化上的不同反應(yīng)。

2、 二、AtPCS1轉(zhuǎn)基因煙草Cd耐性和積累水平的研究:　　為探索植物螯合肽合成酶(PCS)過量表達能否增強植物對Cd的耐性和積累能力，將擬南芥AtPCS1cDNA與CaMV35S啟動子相連后(35S：：AtPCS1)轉(zhuǎn)入煙草，獲得了T1代轉(zhuǎn)基因植株。經(jīng)抗生素抗性篩選和分子鑒定(PCR、Southernblot和Northernblot)，證實AtPCS1在T1代中的整合和表達。用250μMCdCl2對部分轉(zhuǎn)基因植株小苗處理1個月

3、，并以根長作為小苗Cd耐性的指標(biāo)。 三、利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將細菌gshI轉(zhuǎn)入匍匐翦股穎:　　本研究建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的，利用潮霉素抗性作為篩選標(biāo)記的匍匐翦股穎轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。以包含35SCaMV啟動子和E.coligshIcDNA的pCAMBIA13011為表達載體，用農(nóng)桿菌EHA105對來源于成熟種子的胚性愈傷組織進行感染，通過共培養(yǎng)和潮霉素抗性篩選后獲得了30株轉(zhuǎn)基因再生植株。經(jīng)過PCR和Southernblot分析后證明外源基因已