納米銀顆粒對(duì)血腦屏障的影響及其對(duì)神經(jīng)元毒性研究.pdf

1、納米銀具有優(yōu)異的長(zhǎng)效廣譜抗菌活性，是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用最早、最廣泛的納米材料之一，已被廣泛應(yīng)用于各種護(hù)理產(chǎn)品和醫(yī)療器械。由于納米抗菌材料在使用過(guò)程中，大多是與人體組織或細(xì)胞相互作用，所以必須考慮到它對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元等細(xì)胞的毒性。另外，與其它的生物材料相比，納米銀本身具有粒徑小、表面活性高以及吸附能力強(qiáng)等一些特殊的理化性質(zhì)，岡此，更容易通過(guò)細(xì)胞問(wèn)隙進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)中細(xì)胞器相互作用；還可能通過(guò)一些特殊的生理屏障，積蓄到深部組織，引起細(xì)胞

2、和組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)的改變。所以本研究主要研究了納米銀顆粒對(duì)血腦屏障的影響及其引起的神經(jīng)元細(xì)胞毒性。
　　 本課題首先了解納米銀顆粒是否能夠通過(guò)血腦屏障，對(duì)其血腦屏障通過(guò)率是否存在劑量-效應(yīng)關(guān)系?為此，第一步先進(jìn)行了BMVEC和AC兩種原代細(xì)胞共同培養(yǎng)建立血腦屏障體外模型，并通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和跨膜電阻值兩種方法對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示所建立的血腦屏障模型的細(xì)胞間致密性高，其結(jié)構(gòu)和形態(tài)與體內(nèi)狀態(tài)的血腦屏障相似；可以用于進(jìn)一步

3、的研究。之后，再運(yùn)用建立的體外血腦屏障模型，對(duì)不同濃度的銀粒子通過(guò)BBB體外模型的能力進(jìn)行了研究，計(jì)算了納米銀顆粒對(duì)BBB的通過(guò)率，并采用透射電鏡進(jìn)行BBB細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察，檢測(cè)不同濃度的納米銀顆粒對(duì)BBB的損傷、對(duì)細(xì)胞間緊密連接程度的破壞。結(jié)果顯示當(dāng)納米銀顆粒劑量小于50μg/ml時(shí)，納米銀顆?；静荒芡高^(guò)BBB，但之后隨后隨劑量增加，會(huì)有較多的納米銀顆粒通過(guò)血腦屏障。當(dāng)濃度在50-200μg/ml時(shí)，納米銀顆粒進(jìn)入BBB細(xì)胞內(nèi)和通過(guò)

4、BBB的能力呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系，隨著劑量再增加，對(duì)細(xì)胞損害程度增加，即納米銀顆粒能通過(guò)胞飲進(jìn)入到BMVEC和AC細(xì)胞內(nèi)并引發(fā)細(xì)胞水腫，劑量越大，細(xì)胞受損越嚴(yán)重，構(gòu)成BBB主要屏障功能的血管內(nèi)皮細(xì)胞問(wèn)的緊密連接也會(huì)被破壞的越嚴(yán)重，就會(huì)有越多的納米銀顆粒通過(guò)BBB。本研究結(jié)果證明納米銀顆?？梢云茐牟⑼ㄟ^(guò)血腦屏障，提示必須對(duì)其可能引起的腦毒性給予足夠的重視。
　　 在本課題第一部分的基礎(chǔ)上，又進(jìn)一步研究了納米銀顆粒對(duì)腦神經(jīng)元的細(xì)胞毒性

5、。在本部分研究中，首先進(jìn)行神經(jīng)元原代培養(yǎng)以供體外細(xì)胞毒性研究使用。然后進(jìn)行了不同劑量納米銀顆粒對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，來(lái)探索納米銀顆粒引起神經(jīng)元細(xì)胞毒性的原因。結(jié)果表明，不同濃度的納米銀顆粒對(duì)體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果有明顯的影響；當(dāng)納米銀濃度小于25μg/ml時(shí)，細(xì)胞RGR均大于90％，細(xì)胞毒性較?。划?dāng)納米銀濃度在25-250μg/ml的濃度范圍內(nèi)時(shí)，納米銀顆粒的濃度與神經(jīng)元細(xì)胞的增殖率呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。電鏡觀察結(jié)果表明：小于25μg/ml