版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、蘇云金芽孢桿菌(Bt)作為目前應(yīng)用最廣泛的微生物殺蟲劑,由于具有對(duì)環(huán)境友好,對(duì)人畜無害,殺蟲譜廣等優(yōu)勢(shì),在生物殺蟲劑及轉(zhuǎn)基因材料研究中一直備受關(guān)注。隨著轉(zhuǎn)Bt Cry基因在抗蟲性作物中大面積的推廣及應(yīng)用,在給人類帶來極其顯著的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和生態(tài)效益的同時(shí),其應(yīng)用存在的生態(tài)安全風(fēng)險(xiǎn)以及對(duì)人類和其它非靶標(biāo)生物的安全隱患也備受關(guān)注,越來越多的國家針對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品建立了標(biāo)識(shí)系統(tǒng),因此對(duì)轉(zhuǎn)Cry基因作物中毒素表達(dá)產(chǎn)物的安全篩查檢測(cè)就尤顯迫切。目前報(bào)道
2、對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中毒素蛋白的檢測(cè)方法和市場(chǎng)應(yīng)用的ELISA試劑盒主要是單一毒素的抗體檢測(cè),難以滿足實(shí)際應(yīng)用時(shí)一種抗體檢測(cè)多種毒素的需求。因此,憑借Bt Cry毒素三維結(jié)構(gòu)具有較高相似性的特點(diǎn),開發(fā)基于共性結(jié)構(gòu)的Bt Cry毒素廣譜特異性檢測(cè)技術(shù)是一項(xiàng)非常有應(yīng)用價(jià)值的工作。
本研究以5種Cry1類毒素(Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1B、Cry1C、Cry1F)為對(duì)象,分析定位共性結(jié)構(gòu)域,表達(dá)并純化獲得共性結(jié)構(gòu)域蛋白,用于制備針
3、對(duì)Bt Cry1類毒素的廣譜特異性抗體,應(yīng)用于Bt毒素的檢測(cè),以期為Bt制劑及轉(zhuǎn)基因Bt Cry毒素蛋白的殘留檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果包括以下幾方面:
1、分析并定位五種Cry1類毒素的共性結(jié)構(gòu)域
運(yùn)用生物信息學(xué)軟件和網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫資源,首先對(duì)5種Cry1類毒素(Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1B、Cry1C、Cry1F)的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析,然后采取同源建模的方法分別預(yù)測(cè)了這五種Cry1類毒素的DomainⅠ三維
4、結(jié)構(gòu)模型并分析了相關(guān)的生物學(xué)功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn),五種Cry1類毒素的三個(gè)結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列比對(duì),其中DomainⅠ的序列一致性最高達(dá)到71%,而且在三維結(jié)構(gòu)上具有高度的相似性,DomainⅠ幾乎完全重合,構(gòu)建的模型經(jīng)Ramachandran plot、ERRAT和Verify3D模型評(píng)價(jià)軟件檢驗(yàn)均具有合理性。綜合分析結(jié)果,確定5種Cry1類毒素的DomainⅠ區(qū)域?yàn)楣残越Y(jié)構(gòu)域。
2、共性結(jié)構(gòu)域蛋白的原核表達(dá)、純化及生物學(xué)鑒定
5、> 通過采用基因工程技術(shù),設(shè)計(jì)引物并擴(kuò)增DomainⅠ基因,構(gòu)建pET26b-DomainⅠ的原核表達(dá)載體,重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定、序列比對(duì)驗(yàn)證正確后,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)共性結(jié)構(gòu)域蛋白,并對(duì)其表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化、鑒定。結(jié)果原核表達(dá)、純化獲得共性結(jié)構(gòu)域蛋白,經(jīng)抗原性分析結(jié)合ELISA試驗(yàn)驗(yàn)證其具備很好的免疫原性和免疫反應(yīng)性,為下一步利用共性結(jié)構(gòu)域?yàn)榘袠?biāo)分子制備廣譜特異性識(shí)別Cry1類抗體奠定基礎(chǔ)。
3
6、、Bt Cry1類毒素廣譜噬菌體抗體的篩選、鑒定及活性分析
以純化的共性結(jié)構(gòu)域蛋白作為篩選分子,利用噬菌體展示技術(shù)通過扣除篩選(subtractive panning)策略從人源噬菌體單域抗體庫(DAb庫)中篩選具有廣譜特異性的單域抗體并獲得其基因序列。結(jié)果顯示:經(jīng)過4輪篩選后,通過單克隆ELISA方法和PCR鑒定出9個(gè)陽性克隆,經(jīng)DNA測(cè)序和氨基酸序列比對(duì),最終得到5株不同氨基酸序列的陽性克隆,其中E3對(duì)5種Cry1類毒素蛋
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人源Fab噬菌體抗體庫的構(gòu)建及Amylin抗體的篩選與鑒定.pdf
- 人源性噬菌體抗體庫中抗CEA抗體的篩選與初步鑒定.pdf
- 黑素瘤患者噬菌體抗體庫的構(gòu)建與篩選.pdf
- 豬源噬菌體抗體庫的構(gòu)建與抗PRRSV抗體的篩選.pdf
- 氧氟沙星噬菌體抗體庫構(gòu)建及篩選.pdf
- 利用噬菌體展示技術(shù)篩選Cry2Ab毒素受體結(jié)合表位的研究.pdf
- B細(xì)胞淋巴瘤Fab噬菌體抗體庫的構(gòu)建、篩選及鑒定.pdf
- 兩株乳桿菌噬菌體的分離鑒定及抗噬菌體菌株的篩選.pdf
- 結(jié)腸癌特異性噬菌體抗體篩選及鑒定的初步研究.pdf
- 天然人源噬菌體抗體庫的構(gòu)建和篩選.pdf
- 矽肺大鼠噬菌體單鏈抗體庫構(gòu)建與矽肺相關(guān)抗體篩選.pdf
- 人源性大腸癌抗體Fab段噬菌體呈現(xiàn)庫的篩選與鑒定.pdf
- 從噬菌體scFv人源抗體庫中富集篩選抗Aβ抗體基因并初步鑒定.pdf
- 大容量噬菌體抗體庫的構(gòu)建及鑒定.pdf
- 噬菌體抗體庫構(gòu)建及西維因單鏈抗體的篩選.pdf
- 赭曲霉毒素A單克隆抗體的制備及其噬菌體模擬表位的篩選.pdf
- 魚源Fab噬菌體抗體庫的篩選、鑒定及抗SAs抗體的可溶性表達(dá).pdf
- 人源天然Fab噬菌體抗體庫的構(gòu)建及抗c-Met抗體的篩選、鑒定.pdf
- 全人源抗CCR7噬菌體單鏈抗體的篩選及初步鑒定.pdf
- 全人源抗肝癌噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建與篩選.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論