用合成多肽制備Bt Cry1A抗體的研究.pdf

1、ELISA方法因其簡便、快速、準(zhǔn)確的檢測Bt殺蟲晶體蛋白而廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)Bt基因棉中殺蟲晶體蛋白含量的測定，Bt基因的表達(dá)規(guī)律與抗蟲性的時(shí)空變化等研究。ELISA方法的準(zhǔn)確性和可靠性完全取決于BtCry1A抗體的特異性。 為解決抗體的特異性問題，本研究采用合成多肽的方法制備BtCry1A抗體。運(yùn)用分子生物學(xué)軟件對BtCry1A殺蟲晶體蛋白的抗原表位進(jìn)行預(yù)測分析，確定了兩段具有高親水性和強(qiáng)抗原性的多肽片段，各含16個(gè)氨基酸殘基，利用

2、固相合成法合成，經(jīng)HPLC進(jìn)行純化后質(zhì)譜檢驗(yàn)其分子質(zhì)量，并利用戊二醛法將其與BSA聯(lián)結(jié)成免疫原，免疫新西蘭大耳白兔制備多克隆抗體，并應(yīng)用于ELSA方法對轉(zhuǎn)Bt基因棉中的殺蟲晶體蛋白進(jìn)行檢測。 試驗(yàn)獲得了能識別Bt殺蟲晶體蛋白的高效價(jià)抗血清?？贵w滴度為1：50000，檢測靈敏度為49.7ng/mL，用此抗體建立了檢測Bt殺蟲晶體蛋白的ELISA方法。應(yīng)用于轉(zhuǎn)Bt基因棉的檢測中，能有效地區(qū)分常規(guī)棉和轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種，并且能對其中的B