胡桃楸體胚發(fā)生及胚性細(xì)胞懸浮體系的建立.pdf

1、胡桃楸（Juglans mandshurica Maxim），屬胡桃科落葉喬木，產(chǎn)于黃河流域以北和東北地區(qū)。胡桃楸木材優(yōu)良被人們稱為“東北三大硬闊”（水曲柳、胡桃楸：黃菠蘿）之一。由于胡桃楸樹形優(yōu)美觀賞效果好，并具有較好的抗性和耐性，同時可吸收工業(yè)廢氣改善人類的生存環(huán)境，因此近年來在園林綠化中應(yīng)用較為廣泛，主要是街道綠化的行植和小環(huán)境的片植。此外胡桃楸還具有較高的藥用和工業(yè)生產(chǎn)價值。近年來胡桃楸資源的過度開發(fā)利用及種子庫繁殖率低等多種原

2、因?qū)е铝撕议绷帜举Y源的匱乏。體胚培養(yǎng)為種質(zhì)資源的保存和利用提供了新的途徑。本論文主要對胡桃楸體胚的發(fā)生體系及胚性細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的建立進(jìn)行了深入研究，為實現(xiàn)胡桃楸的快速繁殖、良種培育、體胚生物反應(yīng)器生產(chǎn)技術(shù)研制以及林木樹種基因工程的研究奠定了基礎(chǔ)，主要研究結(jié)果如下：
　　 1．誘導(dǎo)胡桃楸胚性愈傷組織的最適條件是：①以合子胚為外植體時最易誘導(dǎo)出胚性愈傷組織，外植體最佳取材時期為5-6月（幼胚），合子胚愈傷誘導(dǎo)率最高達(dá)91.3％。

3、②胡桃楸胚性愈傷組織最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.0mg·L-12，4-D+0.5mg·L-16-BA附加蔗糖30g/L、瓊脂6g/L。③體胚的誘導(dǎo)、發(fā)育和分化的適宜的培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基附加蔗糖309·L-1、水解酪蛋白700mg·L-1、瓊脂69/L并且不添加任何生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。
　　 2．懸浮培養(yǎng)最佳繁殖培養(yǎng)基為1/2MS+0.05mg/L2，4-D的液體培養(yǎng)基；最佳體胚發(fā)育培養(yǎng)基為1/4MS不添加任何生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的液體培養(yǎng)基

4、；最佳接種密度為7g/L，此濃度既有利于增殖，有利于發(fā)育生長。
　　 3．胡桃楸懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液中，pH值的變化趨勢呈“V”字型，細(xì)胞干重增加值變化呈“S”形曲線，胡桃楸懸浮細(xì)胞接種后第6d，培養(yǎng)液的pH平均值下降至4.21，細(xì)胞干重增長緩慢；12d時培養(yǎng)液pH平均值開始逐漸上升至5.3，細(xì)胞干重增長快速；15d以后懸浮細(xì)胞生長末期時將培養(yǎng)液的pH平均值維持在5.44左右，細(xì)胞干重趨于穩(wěn)定。
　　 4．在細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過程中