基于PhiX174基因E介導(dǎo)的副豬嗜血桿菌細(xì)菌幽靈研究.pdf

1、細(xì)菌幽靈(BG)是一種新型的具有佐劑性質(zhì)的疫苗或DNA疫苗遞送系統(tǒng)。它是被移去了細(xì)胞質(zhì)的無活性，但含有細(xì)胞形態(tài)和抗原結(jié)構(gòu)特性的細(xì)菌細(xì)胞包膜。它是通過裂解基因在革蘭氏陰性菌中的表達(dá)進(jìn)行遺傳滅活而實現(xiàn)的。細(xì)菌幽靈表現(xiàn)細(xì)胞表面的天然功能性和抗原結(jié)構(gòu)。因此，將該技術(shù)應(yīng)用于動物疫苗研究，對于為動物疾病感染的預(yù)防開發(fā)安全有效的新型疫苗具有十分重要的意義。我們以豬革拉瑟氏病病原菌副豬嗜血桿菌為受體菌，研究了含PhiX174 E裂解基因的重組質(zhì)粒，通過

2、克隆到位于熱敏λpL/pRcI857、lacpo-lacI8啟動子阻遏系統(tǒng)和tol表達(dá)系統(tǒng)控制的質(zhì)粒載體。E介導(dǎo)裂解溫控的主要通過λpR基因表達(dá)調(diào)節(jié)途徑延長λpR啟動子或cI857阻遏系統(tǒng)的熱穩(wěn)定性。突變的λpR啟動子或操縱子區(qū)導(dǎo)致一個新的表達(dá)系統(tǒng)，即阻遏E基因在37℃表達(dá)，但允許在39～42℃范圍內(nèi)誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。主要結(jié)果如下：
　　 1.將含有裂解基因E的質(zhì)粒pHH43轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌DH5α中，誘導(dǎo)表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)裂解基因在大腸

3、桿菌中的裂解率最高可達(dá)到99.84％，通過掃描電鏡觀察在細(xì)菌的兩極和細(xì)菌分裂位置形成了疏水孔道。但將pHH43轉(zhuǎn)化副豬嗜血桿菌沒有成功。
　　 2.將PHIX174基因E的表達(dá)盒(Cassette)克隆到pLS88穿梭質(zhì)粒，構(gòu)建了pLS88-E質(zhì)粒。經(jīng)酶切鑒定和序列測定與理論PHIX174 E基因一致。
　　 3.將重組質(zhì)粒pLS88-E分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌和副豬嗜血桿菌，誘導(dǎo)表達(dá)，比較裂解率。結(jié)果顯示兩種細(xì)菌的在溫敏誘導(dǎo)點