茶樹熒光性綠斑病葉的自發(fā)熒光顯微分析.pdf

1、茶樹熒光性綠斑病是一種全國(guó)范圍內(nèi)普遍發(fā)生的茶樹成葉生理性病害，該病害典型癥狀表現(xiàn)為葉片下表皮局部凸起、呈綠色，且能發(fā)射黃綠色熒光。 為了以黃、綠色自發(fā)熒光為探針了解茶樹熒光性綠斑病的發(fā)生規(guī)律，為黃色、綠色熒光物質(zhì)的分離鑒定提供光譜學(xué)依據(jù)，以及了解熒光性綠斑病葉的生理狀態(tài)，本課題以茶樹正常葉片與熒光性綠斑病葉為材料，應(yīng)用熒光顯微技術(shù)、顯微熒光光譜成像技術(shù)、激光掃描共聚焦顯微技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)研究了茶樹熒光性綠斑病葉中黃、綠色自發(fā)熒光

2、的顯微觀察條件、發(fā)射光譜、發(fā)光部位和病葉內(nèi)部游離鈣離子的分布以及胞內(nèi)pH。結(jié)果表明： (1)在不同激發(fā)光照射下，茶樹熒光性綠斑病葉能發(fā)射多種自發(fā)熒光，其中黃、綠色熒光顯微觀察的最佳條件為：藍(lán)光激發(fā)，彩色和綠色單色光模式記錄圖像；在綠光、黃色范圍有三個(gè)熒光峰，其波長(zhǎng)分別為515、535和585nm。 (2)最初發(fā)出綠色、黃色熒光的病變部位是維管束鞘細(xì)胞，隨后出現(xiàn)在部分海綿細(xì)胞、柵欄細(xì)胞和表皮細(xì)胞中，在這些病變細(xì)胞中，葉綠體

3、解體，紅色熒光強(qiáng)度減弱，黃色、綠色熒光強(qiáng)度大，同時(shí)因?yàn)槎鄠€(gè)病變細(xì)胞密聚在一起，從而產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光亮點(diǎn)能被肉眼所觀察到；黃色、綠色熒光在細(xì)胞中的發(fā)光位置定位于液泡。 (3)正常葉片的胞內(nèi)pH平均值為5.35，病害葉片的胞內(nèi)pH平均值為6.89；病害葉片胞內(nèi)pH與病害程度成顯著正相關(guān)，胞內(nèi)pH的升高是黃綠色熒光逐漸增強(qiáng)的一個(gè)原因。 (4)正常葉片胞內(nèi)游離鈣離子濃度明顯高于病葉胞內(nèi)游離鈣離子濃度，胞間存在高濃度鈣離子分布區(qū)域：