右旋糖酐質(zhì)量控制新方法和新的藥學應用研究.pdf

1、右旋糖酐（Dextran）是葡聚糖的一種，為一線型結(jié)構(gòu)的中性多糖，廣泛存在于微生物中，構(gòu)成右旋糖酐主鏈的糖酐鍵為α-1,6糖酐鍵，并含有少量以α-1,3連接的支鏈結(jié)構(gòu)。右旋糖酐是應用最廣泛的葡聚糖，在醫(yī)藥、食品、化工等行業(yè)都有不同的用途。目前，右旋糖酐的生產(chǎn)是以蔗糖為底物，經(jīng)鏈球菌、乳酸桿菌、明串珠菌等微生物發(fā)酵而生成的高分子葡聚糖，再經(jīng)酸水解和乙醇分級得到具有不同相對分子質(zhì)量大小的右旋糖酐產(chǎn)品。但不同種類微生物發(fā)酵產(chǎn)生的右旋糖酐分子量

2、差異很大，且支鏈形式和支鏈度上也存在很大差異。右旋糖酐分子量大小決定了其應用范疇，如低分子右旋糖酐臨床上應用于休克早期，中分子量的右旋糖酐其大小與人體血漿蛋白及球蛋白分子相近，可吸收進入體內(nèi)然后水解為葡萄糖而作為能量補充劑。同時，右旋糖酐支鏈形式和支鏈度對右旋糖酐的實際應用影響重大，但目前對右旋糖酐支鏈形式和支鏈度的判定缺乏有效的方法。在以往的文獻報導中，對右旋糖酐支鏈形式及支鏈度的研究主要有氣質(zhì)聯(lián)用和核磁共振兩種方式。氣質(zhì)聯(lián)用方法分析

3、的前提是對樣品進行甲基化、水解、乙?；纫幌盗醒苌?，在此過程中無可避免地導致了樣品部分結(jié)構(gòu)信息的丟失。并且由于不同連接方式寡糖的離子化效率不同，氣質(zhì)聯(lián)用方法不能準確判斷支鏈度，只能判斷支鏈形式。核磁共振(NMR)是判斷支鏈形式和支鏈度的有效方式，但是NMR樣品耗量較大，且樣品的核磁譜信息會疊加在一起，費時費力很難解析。
　　本文以右旋糖酐的右旋糖酐酶(dextranase)水解產(chǎn)物為研究對象，旨在建立超高效親水相互作用色譜-飛行

4、時間質(zhì)譜聯(lián)用(UP-HILIC-Q/TOF)方法，通過優(yōu)化色譜方法對不同聚合度以及同一聚合度不同連接方式寡糖同分異構(gòu)體進行分離，可以有效消除寡糖α，β異構(gòu)影響且不需要衍生化。利用二級質(zhì)譜MS/MS對酶解終產(chǎn)物進行結(jié)構(gòu)解析，確證酶解終產(chǎn)物中寡糖聚合度及其連接方式?；赿extranase特異性水解葡聚糖α-1，6連接的作用，根據(jù)酶不識別片段的結(jié)構(gòu)即可推斷出右旋糖酐的支鏈形式。但同一聚合度不同連接方式的寡糖同分異構(gòu)體在此液相方法上的分離有限

5、，且不同結(jié)構(gòu)的寡糖質(zhì)譜響應各異，不能很好地進行定量分析。在此研究工作的基礎(chǔ)上，鑒于離子色譜(HPAEC，簡稱 IC)對糖類化合物很好的分離效果，以及安培脈沖檢測器(PAD)對糖類化合物高靈敏度的特異性檢測作用，我們改進儀器設(shè)置，在離子色譜和質(zhì)譜間安裝陽離子樹脂交換抑制器(MSM)，對離子色譜得流動想進行在線脫鹽處理，克服了離子色譜高鹽濃度洗脫劑無法直接進入質(zhì)譜來分析的難點，使在線安培檢測器和在線質(zhì)譜檢測平行存在成為可能。該方法成功搭建了

6、HPAEC-PAD-QTOF聯(lián)用平臺，很好地結(jié)合了離子色譜和QTOF高選擇性、高靈敏度、高準確度等特性，能很好地應用于右旋糖酐支鏈形式支鏈度的確定，該方法簡便、高效、樣品耗量少，是糖類化合物支鏈定性定量分析的有效方法。基于多糖羧甲基化能提高多糖的溶解度、電負性，改變多糖分子伸展方向及立體結(jié)構(gòu)，能讓多糖具備新的生物活性，本文主要研究了羧甲基化右旋糖酐寡糖在氧糖剝奪損傷模型中對神經(jīng)元細胞缺糖缺氧保護作用，并探索羧甲基數(shù)量、羧甲基取代度與抗氧