丹參素對(duì)大鼠減體積肝移植后肝臟再生的影響.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)在穩(wěn)定建立大鼠60％減體積肝移植模型基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜法測(cè)定純度超過(guò)98％，劑量為1mg·kg-1·d-1的丹參素，經(jīng)大鼠腹腔注射，對(duì)減體積肝移植后肝臟再生進(jìn)行干預(yù)，以研究丹參素對(duì)肝臟再生的影響。
　　 方法：
　　 1．單人直視下大鼠減體積肝移植模型的建立
　　 (1)采用改良的“二袖套法”，單人直視下操作，建立雄性SD大鼠減體積肝移植模型，對(duì)預(yù)實(shí)驗(yàn)階段和正式實(shí)驗(yàn)階段圍手術(shù)期時(shí)

2、間、手術(shù)成功率及術(shù)后1周存活率進(jìn)行比較
　　 (2)分析術(shù)后24小時(shí)內(nèi)受體大鼠死亡原因，總結(jié)單人直視下大鼠減體積肝移植模型建模技巧。
　　 2．丹參素對(duì)大鼠減體積肝移植后肝臟再生的影響
　　 (1)將受體隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組(n=5)和丹參素治療組（n=5），從減體積肝移植術(shù)后3h開(kāi)始，分別經(jīng)腹腔注射生理鹽水(0.3ml.d1)和用相同體積生理鹽水稀釋的丹參素(1.0mg·kg-1·d-1)，以后每天注射1次相

3、同劑量的生理鹽水或丹參素。于術(shù)后第1，3，6天每組各處死5只大鼠，取受體肝臟及血標(biāo)本。
　　 (2)肝再生率稱取再生肝濕重，結(jié)合術(shù)中已經(jīng)稱取的供肝濕重，按照公式：肝再生率=（再生肝濕重-供肝濕重）/供肝濕重×100％，計(jì)算肝再生率。
　　 (3)肝功能檢測(cè)從下腔靜脈取血，室溫靜置20min，1500r離心10min，取血清后送溫州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、ALB水平。
　　

4、 (4)病理學(xué)改變沿縱軸取肝中葉約1.0cm×1.0cm×0.3cm大小組織塊，置于4％多聚甲醛中固定24h后包埋切片，HE染色后光鏡下觀察肝組織損傷、單核細(xì)胞浸潤(rùn)及肝有絲分裂細(xì)胞。
　　 (5)肝組織PCNA標(biāo)記指數(shù)采用免疫組化SP法檢測(cè)，細(xì)胞核呈棕黃色者為PCNA陽(yáng)性細(xì)胞，每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)視野(200×)，按照陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/有核細(xì)胞數(shù)×100％，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，取其均值，即PCNA標(biāo)記指數(shù)。
　　 (6)肝組織

5、TNF-α、IL-6取0.2克肝組織，加入冰生理鹽水使得終體積為2ml。采用電動(dòng)勻漿器，轉(zhuǎn)速7000r/min，勻漿5min，再3500r離心15min，取上清，用ELISA法檢測(cè)肝組織TNF-α、IL-6的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．成功建立大鼠減體積肝移植模型。供肝濕重占修剪前全肝濕重的（59±2）％。預(yù)實(shí)驗(yàn)62次，無(wú)肝期(27.67±4.62)min，手術(shù)成功率32.3％，1周存活率8.1％，改進(jìn)操作技巧后正式

6、實(shí)驗(yàn)45次，無(wú)肝期縮短至(16.27±0.88)min，手術(shù)成功率及1周存活率分別為93.3％、66.7％。
　　 2．肝再生率兩組肝再生率均呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)。術(shù)后第1、3天，兩組肝再生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，術(shù)后第6天，丹參素治療組再生率較生理鹽水對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3．血清AL、ALB水平兩組大鼠血清ALT隨著術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)推移逐漸降低，血清ALB隨著術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)推移

7、逐漸上升。與生理鹽水對(duì)照組比較，丹參素治療組術(shù)后第3、6天血清ALT均明顯降低，血清ALB均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　 4.病理學(xué)改變兩組大鼠術(shù)后第1、3天肝臟匯管區(qū)均可見(jiàn)少量單核細(xì)胞浸潤(rùn)，肝竇輕度擴(kuò)張，未見(jiàn)單核細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)肝細(xì)胞水腫變性，術(shù)后第6天，生理鹽水對(duì)照組匯管區(qū)單核細(xì)胞浸潤(rùn)加重，并可見(jiàn)肝竇明顯擴(kuò)張，竇內(nèi)單核細(xì)胞浸潤(rùn)，但肝臟結(jié)構(gòu)基本正常，未見(jiàn)壞死肝細(xì)胞，丹參素治療組與之相比，匯管區(qū)單核細(xì)胞浸潤(rùn)

8、較少，肝細(xì)胞水腫程度輕。兩組術(shù)后第1天，未見(jiàn)肝有絲分裂細(xì)胞，術(shù)后第3天均出現(xiàn)較多的肝有絲分裂細(xì)胞，但兩組未見(jiàn)明顯區(qū)別。術(shù)后第6天，丹參素治療組肝有絲分裂細(xì)胞較生理鹽水對(duì)照組多。
　　 5．肝組織PCNA標(biāo)記指數(shù)兩組PCNA標(biāo)記指數(shù)隨時(shí)間點(diǎn)的推移逐漸上升。術(shù)后第1、3天，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。術(shù)后第6天，丹參素治療組PCNA標(biāo)記指數(shù)明顯高于生理鹽水對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6．肝組織

9、TNF-α、IL-6兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肝組織TNF-α、IL-6均逐漸降低。兩組大鼠術(shù)后1d肝組織TNF-α、IL-6無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。丹參素治療組術(shù)后3、6d肝組織TNF-α、IL-6均明顯低于生理鹽水對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．改進(jìn)單人直視操作技巧后建立的大鼠減體積肝移植模型，穩(wěn)定可靠，適用于減體積肝移植后肝再生機(jī)制及其干預(yù)手段的研究；
　　 2．丹參素可以促