馬尾松營養(yǎng)體組織培養(yǎng).pdf

1、馬尾松(PinusmassonianaLamb.)是我國南方地區(qū)低山丘陵荒山造林的先鋒樹種，在我國林業(yè)生產(chǎn)中占有十分重要的地位。開展馬尾松快速繁殖和體細(xì)胞胚胎發(fā)生等技術(shù)的研究，對其遺傳轉(zhuǎn)化體系建立、開展基因研究等都有重要意義。
　　 本實驗以湖南省林科院天際嶺林場優(yōu)良母樹枝梢頂端分生組織為外植體，通過實驗設(shè)計，探討了外植體愈傷組織誘導(dǎo)的條件;對誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織進行了形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)鑒定和胚性愈傷組織轉(zhuǎn)化實驗設(shè)計，并對愈傷組織誘導(dǎo)

2、器官發(fā)生進行了研究。實驗結(jié)果表明:
　　 1、湖南省馬尾松枝梢頂端分生組織最佳的采集時期是3月中旬到4月底，愈傷組織誘導(dǎo)率最高達89.8％，平均誘導(dǎo)率在80％以上;愈傷組組織增殖能力強，在形態(tài)上表現(xiàn)為白色或淡綠色，結(jié)構(gòu)疏松半透明狀，表面濕潤有粘性，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有類胚性愈傷組織產(chǎn)生。
　　 2、冰箱保存時間對馬尾松外植體愈傷組織誘導(dǎo)沒有明顯影響，2012年4月16日采集的外植體在冰箱冷藏保存了114天后，仍然有84.0

3、％的愈傷組織誘導(dǎo)率。這說明采樣一定要在最佳時期采，若不能及時進行誘導(dǎo)，可在冰箱里冷藏。此外，冰箱保存一定時間可以明顯降低外植體愈傷組織褐化率。
　　 3、馬尾松枝梢頂端分生組織最佳的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為10#培養(yǎng)基:改良GD+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+CH1000mg/L+Gln500mg/L+蔗糖30.0g/L和12#培養(yǎng)基:改良GD+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+

4、2,4-D3.0mg/L+CH1000mg/L+Gln500mg/L+蔗糖30g/L。
　　 4、外植體最佳接種長度為0.1-0.2cm，愈傷組織細(xì)胞在切口處大量增殖和生長，外植體全部分化成愈傷組織，誘導(dǎo)率最高80％以上，幾乎沒有褐化和污染現(xiàn)象發(fā)生。外植體最佳接種方式是豎直接種，豎直接種的外植體愈傷組織形成較早，在切口處形成大量細(xì)胞群，愈傷組織細(xì)胞分布較均勻，褐化和污染程度較低。
　　 5、TDZ在愈傷組織細(xì)胞生長和維持