GLP-1受體在大鼠肝星狀細(xì)胞的表達(dá)及利拉魯肽對(duì)高糖條件下大鼠肝星狀細(xì)胞增殖的作用.pdf

1、目的:目前非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver diseaseNAFLD)的發(fā)生日益增加。NAFLD包括從肝臟脂肪變性到脂肪性肝炎，進(jìn)而發(fā)展為肝臟纖維化，最終至肝硬化的一系列病變。但是目前尚沒(méi)有藥物可以治療NAFLD。胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide-1 GLP-1)是由腸道內(nèi)分泌細(xì)胞L細(xì)胞分泌的一種重要的腸促胰島素，GLP-1類(lèi)似物利拉魯肽作為降糖藥物已廣泛的應(yīng)用于臨床，

2、其胰腺外作用是目前糖尿病領(lǐng)域關(guān)注的熱點(diǎn)。GLP-1受體介導(dǎo)的抗臟器纖維化作用已得到初步證實(shí)，其機(jī)制非常復(fù)雜，在不同的臟器可能存在不同的作用通路，并且一些參與臟器纖維化的關(guān)鍵細(xì)胞如肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells HSC）等最有可能參與其中。那么作為肝纖維化的關(guān)鍵細(xì)胞HSC上是否存在GLP-1受體的表達(dá)呢？本實(shí)驗(yàn)旨在探討GLP-1受體在大鼠HSC是否表達(dá)及GLP-1類(lèi)似物利拉魯肽對(duì)高糖條件下大鼠HSC的作用，從而探

3、討其對(duì)于NAFLD及肝臟纖維化的作用。
　　方法:
　　1、大鼠HSC的培養(yǎng):大鼠HSC復(fù)蘇后接種于無(wú)菌塑料培養(yǎng)瓶中，37℃、體積分?jǐn)?shù)為5％的CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含體積分?jǐn)?shù)為10％胎牛血清的1640，每天換液1次，48小時(shí)后提取樣本于顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，并進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析。
　　2、Western法檢測(cè)GLP-1受體蛋白在大鼠HSC的表達(dá)。
　　3、Real-time PCR法檢測(cè)大鼠HS

4、CGLP-1受體mRNA的表達(dá)。
　　4、分組干預(yù):將培養(yǎng)48小時(shí)的大鼠HSC分7組分別為正常糖對(duì)照組(5.5 mmol/L)、高滲對(duì)照組（5.5mmol/L低糖+19.5mmol/L甘露醇）、高糖對(duì)照組（25.0mmol/L）、高糖+低濃度利拉魯肽組（50nmol/L）、高糖+中濃度利拉魯肽組（100nmol/L）、高糖+高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)、正常糖+高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)。
　　5、MT

5、S法檢測(cè)上述7組細(xì)胞的增殖情況。
　　6、數(shù)據(jù)分析:所得數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，統(tǒng)計(jì)分析運(yùn)用SPSS13.0軟件。采用方差分析對(duì)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的7組的光密度(opticaldensity OD)值進(jìn)行比較，采用Bonferroni法進(jìn)行兩兩比較，探討同一時(shí)間點(diǎn)具體不同的組的差別。對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)的高糖+高濃度利拉魯肽采取配對(duì)t檢驗(yàn)，探討時(shí)間對(duì)該組OD值得影響。P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有意義。
　　結(jié)果:
　　1

6、、大鼠HSC形態(tài)學(xué)鑒定
　　倒置顯微鏡下可以觀察到活化的HSC為扁平狀，胞體大，胞體周?chē)型黄稹?br>　　2、Western blot及Real-time PCR檢測(cè)GLP-1受體均在大鼠HSC上有表達(dá)。5個(gè)樣本均測(cè)得GLP-1受體蛋白及mRNA表達(dá)。
　　3、HSC的增殖:高糖組與正常糖組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。高糖+高濃度利拉魯肽干預(yù)組作用48小時(shí)、72小時(shí)時(shí)較高糖對(duì)照組增殖降低(p＜0.05)，但高于正常糖

7、對(duì)照組(p＜0.05)，高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)增殖低于低(50nmol/L)、中(100nmol/L)濃度利拉魯肽組(p＜0.05)，但低、中濃度的利拉魯肽組增殖差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。高滲對(duì)照組及正常糖+高濃度利拉魯肽組同正常糖對(duì)照組比較增殖差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、大鼠HSC上有GLP-1受體的表達(dá)。
　　2、高糖可促進(jìn)大鼠HSC增殖，而利拉魯肽可抑制高糖作用