我國(guó)部分地區(qū)雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株基因型分析及遺傳多態(tài)性研究.pdf

1、雞壞死性腸炎(NE)是由產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens，C.perfringens)引起的并常繼發(fā)或伴于雞球蟲?。ㄇ蛳x感染）/雞球蟲病活卵囊疫苗接種的一種以腸道黏膜上皮細(xì)胞壞死為特征的腸道傳染病。近年來隨著對(duì)飼料中抗菌和抗球蟲藥物添加劑使用的法律限制，大量使用小麥等代替玉米作飼料基礎(chǔ)日糧等因素，雞壞死性腸炎的發(fā)病率和流行率在全球范圍內(nèi)均呈升高趨勢(shì)。研究結(jié)果表明，從外觀健康雞、病雞及不同地區(qū)分離的C.perf

2、ringens菌株在遺傳上存在顯著多態(tài)性，且菌株的致病性與基因型密切相關(guān)。為探明我國(guó)主要養(yǎng)雞地區(qū)雞群中C.perfringens分離株的遺傳多態(tài)性，本研究從我國(guó)主要養(yǎng)雞地區(qū)的外觀健康雞、異常糞便及病死雞腸道采集樣本，分離C.perfringens進(jìn)行毒素基因和抗藥譜檢測(cè)，并應(yīng)用脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)(PFGE)進(jìn)行基因型分析，為雞壞死性腸炎的防控積累基礎(chǔ)數(shù)據(jù)資料。
　　1.為了解我國(guó)不同地區(qū)雞源C.perfringens的分布情況，從

3、7個(gè)省17個(gè)地區(qū)的692份樣品中分離到214株C.perfringens，分離率為31％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其中206株為A型C.Perfringens，8株為C型。在A型菌株中利用單一PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有87株具有β2毒素基因，陽性檢出率為41％;5株具有NetB毒素基因，陽性檢出率為2.3％。以最小抑菌濃度(MIC)檢測(cè)這些分離菌株的抗藥性及抗藥譜，結(jié)果顯示那西肽對(duì)所有分離菌株均具有良好的抑菌效果，四川德陽(2013)、四川眉山(2013)和

4、廣東鶴山(2013)的菌株對(duì)11種藥物均表現(xiàn)出藥物敏感，而廣西桂林(2014)的菌株僅對(duì)那西肽表現(xiàn)出藥物敏感。
　　2.應(yīng)用PFGE分型技術(shù)，對(duì)上述214株中的108株C.perfringens進(jìn)行基因分型分析。在對(duì)文獻(xiàn)方法進(jìn)行優(yōu)化的基礎(chǔ)上，根據(jù)相似度高于75％歸為同一基因簇，高于99％認(rèn)為是同一基因型的分型原則，所分析的108個(gè)菌株可分為15個(gè)基因簇，80個(gè)基因型。實(shí)驗(yàn)表明PFGE圖譜能夠較好的反映分離菌株的遺傳特性，當(dāng)相似度為