乙醇對小鼠睪丸組織的氧化應(yīng)激損傷及其對生精細(xì)胞中Bcl-2-Bax表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過建立乙醇攝入雄性小鼠模型，觀察小鼠睪丸組織氧化應(yīng)激及生精細(xì)胞Bcl-2/Bax的表達(dá)水平，初步探討乙醇攝入對小鼠睪丸組織的氧化應(yīng)激損傷及其與生精細(xì)胞凋亡的關(guān)系及酒精導(dǎo)致小鼠睪丸組織損傷的可能機(jī)制。
　　 方法：2月齡健康雄性昆明小白鼠(SPF級)48只，隨機(jī)分為對照組(A組)、低濃度酒精組(B組)、高濃度酒精組(C組)、高濃度酒精+VitE(D組)，每組12只，每日灌胃一次，每周測量一次體重，記錄小鼠的一般狀態(tài)。42天

2、(3個(gè)生精周期)后處死，睪丸稱重后，右側(cè)睪丸制備成組織勻漿，通過分光光度計(jì)檢測抗氧化指標(biāo)SOD和氧化指標(biāo)MDA水平的變化；左側(cè)睪丸常規(guī)切片，HE染色觀察大體結(jié)構(gòu)，免疫組化(S-P法)檢測Bcl-2/Bax在生精細(xì)胞中的表達(dá)情況，結(jié)果采用IHS評分，0～1分為(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～6分為中等陽性(++)，>6分為強(qiáng)陽性(+++)。利用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：

3、>　　 1)一般指標(biāo)：實(shí)驗(yàn)期間對照組小鼠食欲正常，精神狀態(tài)好，各酒精灌胃組小鼠出現(xiàn)醉酒現(xiàn)象，隨酒精劑量增加，醉酒現(xiàn)象表現(xiàn)愈明顯。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組小鼠體重均有增長，對照組(A組)小鼠平均體重增加最多，高濃度白酒組(C組)平均體重增加最少；各組間小鼠體重增長有明顯差異(P<0.01)，隨酒精濃度的增加，小鼠體重增加逐漸減少。加用VitE組(D組)體重增長大于高濃度組(C組)。各組小鼠睪丸重量系數(shù)無明顯差別。
　　 2)氧化應(yīng)激的變

4、化：與對照組相比，低濃度酒精組(B組)MDA含量增多(P<0.05)，SOD活性升高(P<0.05)；高濃度酒精組(C組)MDA含量明顯增多(P<0.01)，SOD活性明顯降低(P<0.01)，且隨酒精攝入濃度的增高，MDA水平不斷增高。與對照組相比，高濃度酒精+VitE組(D組)MDA含量增多(P<0.05)，SOD活性降低(P<0.05)；但與C組相比，其MDA含量降低(P<0.05)，SOD活性升高(P<0.05)。
　　

5、 3)組織學(xué)的變化：常規(guī)切片HE染色顯示，對照組睪丸組織生精上皮內(nèi)生精細(xì)胞排列有序，形態(tài)正常；而酒精攝入組生精上皮內(nèi)生精細(xì)胞排列紊亂，可見部分生精細(xì)胞脫落，生精細(xì)胞和精子數(shù)量減少，并可見較多的多核巨細(xì)胞。隨著酒精濃度的增加，生精上皮的厚度有減小的趨勢。高濃度酒精攝入+Vit E組(D組)在生精上皮厚度、生精細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)結(jié)構(gòu)等方面，較同劑量的酒精組(C組)為輕。
　　 4)Bcl-2/Bax的表達(dá)：免疫組化結(jié)果顯示Bcl-2/B

6、ax在各組睪丸組織中均有表達(dá)。與對照組相比，各酒精攝入組Bcl-2的表達(dá)下調(diào)，且隨著酒精劑量的增加，其表達(dá)降低；Bax的表達(dá)上調(diào)，隨著酒精劑量的增加，其表達(dá)增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與高濃度酒精組(C組)相比，高濃度酒精+VitE組(D組)Bcl-2的表達(dá)增加，Bax的表達(dá)降低(P<0.05)；但其Bcl-2表達(dá)仍較對照組降低，Bax表達(dá)較對照組升高(P<0.05)。酒精攝入組小鼠睪丸組織MDA含量與Bax表達(dá)呈顯著正相

7、關(guān)(r=0.938，P<0.01)、與Bcl-2表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.899，P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1)過量飲酒可致成年小鼠睪丸組織發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，這可能是睪丸組織損傷和生精細(xì)胞凋亡的原因之一。VitE可以降低酒精攝入小鼠睪丸組織的氧化應(yīng)激損傷。
　　 2)飲酒導(dǎo)致小鼠睪丸組織Bcl-2表達(dá)水平下降，Bax的表達(dá)水平升高，推測酒精攝入造成小鼠睪丸組織氧化應(yīng)激損傷，通過Bcl-2/Bax表達(dá)