自交不親和基因在蘿卜種質資源中的分布及其分子鑒別.pdf

1、本試驗從三個方面就蘿卜自交不親和性的鑒定方法開展了研究，結果如下： 1.采用親和指數(shù)法鑒定蘿卜自交系的自交不親和性。本試驗所選用的試驗材料是經(jīng)過多代自交選育，園藝性狀、自交不親性或親和性等性狀基本穩(wěn)定的蘿卜自交系，共計282份。首先通過田間花期自交授粉，利用親和指數(shù)法初步鑒定材料的親和性。親和指數(shù)=結籽數(shù)/授粉花朵數(shù)。嚴格起見，按下列親和指數(shù)標準，將所有蘿卜試驗材料分為四個等級，Ⅰ不親和：0≤親和指數(shù)＜0.5、Ⅱ弱親和：0.5≤

2、親和指數(shù)＜1、Ⅲ中親和：1≤親和指數(shù)＜2和Ⅳ親和：親和指數(shù)≥2。結果顯示：Ⅰ級材料182份，占所有材料的64.5％；Ⅱ級材料40份，占所有材料的14.2％；Ⅲ級材料31份，占所有材料的11.0％；Ⅳ材料29份，占所有材料的10.3％。為進一步鑒定自交不親和基因類型以及自交不親和系的選育奠定了基礎。 2.利用特異引物PCR法鑒定不同蘿卜自交系的自交不親和性及其不親和基因的分布。利用已發(fā)表的控制蘿卜自交不親和的15個基因的全序列，分

3、別設計合成了15對特異引物，通過特異引物PCR技術，檢測各自交不親和基因在試驗材料中的分布情況。結果表明：多數(shù)自交不親和基因在Ⅰ級材料中普遍分布，在Ⅱ級材料中少量分布，而在Ⅲ級、Ⅳ級材料中基本沒有分布；自交不親和基因的分布與試驗材料自交不親和性的表現(xiàn)呈現(xiàn)密切的關系。本試驗初步建立的特異引物PCR法能針對大多數(shù)自交不親和基因簡便、快速、準確地鑒定材料的自交不親和性，測定周期大為縮短。但是根據(jù)自交不親和基因SLG、SLG6設計出的特異引物7

4、s、7a和引物9s、9a擴增出來的特異條帶在Ⅲ級、Ⅳ級材料中也有一定分布，似乎與蘿卜不親和性的表現(xiàn)不相關，需要進一步鑒定。 3.蘿卜自交不親和性鑒定的CAPS標記的發(fā)展。為了進一步分析自交不親和基因SLG、SLG6的存在是否與蘿卜自交不親和性的表現(xiàn)有關，發(fā)展并利用CAPS標記進行了分析。用Primer5軟件尋找出合適的限制性內切酶TaqⅠ，并尋找到酶切位點。用限制性內切酶TaqⅠ酶切特異引物對7s、7a和9s、9a擴增出的特異片

5、段，得出Ⅰ級材料中擴增出的特異片段被TaqⅠ酶切得出的片段和所預期結果一致，而Ⅲ級、Ⅳ級材料擴增出的特異片段被TaqⅠ酶切得出的片段成多態(tài)性。結果表明：利用該CAPS標記可以快速、準確鑒別自交不親和系和自交親和系。 本研究根據(jù)Genebank中已發(fā)表的的自交不親和基因序列設計特異引物，建立了蘿卜自交不親和鑒定的特異引物PCR技術和CAPS標記技術，該技術可以快速、準確地鑒別出自交不親和系和自交親和系，確定材料的各種S單元型，為自