四點彎曲應力刺激對人骨髓間充質干細胞增殖活性的影響.pdf

1、目的：觀察四點彎曲應力刺激對人骨髓間充質干細胞的增殖活性以及細胞周期的影響。
　　 方法：實驗于2010.9-2011.3在大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院中英再生醫(yī)學中心完成。
　　 1．使用全骨髓培養(yǎng)法分離人骨髓間充質干細胞。進行原代培養(yǎng)，擴增后備用。
　　 2．利用四點彎曲應力細胞加載儀(四川大學華西醫(yī)學院與電子科技大學聯(lián)合研制，專利號：(CN2534576 and CN1425905)，取第4～6代細胞接種于加力

2、板(BDNo.353135)，行爬片處理。分組：空白組，不加力；實驗組，實驗組頻率均為0.5HZ，加力60min，分別受張應力1000μstrain、3000μstrain、5000μstrain的機械信號刺激，空白組不受力學信號刺激，其他培養(yǎng)條件與實驗組一致。
　　 3．細胞行力學干預后，用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)、排列。分別用四甲基偶氮唑細胞計數法、流式細胞儀周期分析、共聚焦顯微鏡檢測鈣離子含量來測量細胞增殖和細胞周期。所

3、有實驗均重復三次。
　　 4．統(tǒng)計學處理：實驗數據均以均數±標準差來表示，使用SPSS16.0軟件包進行單因素方差分析，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義，P＜0.01具有顯著統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1．利用離心法結合全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)細胞增殖迅速，傳代穩(wěn)定。
　　 2．四點彎曲應力細胞加載儀性能穩(wěn)定，準確，培養(yǎng)板未出行裂痕，變形等情況。細胞接種加力板后12～24h貼壁，貼壁良好，24h后細胞覆蓋率約達8

4、0％～90%，無細菌污染現(xiàn)象，可適用于應力刺激體外細胞效應的實驗研究。
　　 3．通過四甲基偶氮唑法細胞計數檢測細胞增殖、流式細胞技術檢測細胞周期及PI指數，激光共聚焦顯微鏡鈣離子探針檢測細胞內鈣離子濃度，發(fā)現(xiàn)適當大小的機械應力刺激對人骨髓間充質干細胞增殖具促進作用，其中3000μstrain的應力刺激作用最明顯，過強的機械應力刺激(5000μstrain)對細胞不具有促增殖效應，并可能存在抑制作用。
　　 結論：適當的