bFGF轉(zhuǎn)染MSCs移植對(duì)COPD大鼠模型IL-10、IL-4的影響及分化研究.pdf

1、目的：
　　研究堿性成纖維生長(zhǎng)因子（bFGF）轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）對(duì)COPD大鼠中IL-10、IL-4表達(dá)的影響及其分化
　　方法：
　　采用全骨髓貼壁細(xì)胞法提取、培養(yǎng)BMSCs。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒。脂多糖（LPS）聯(lián)合煙熏制備COPD大鼠。實(shí)驗(yàn)分5個(gè)組，健康對(duì)照組（A組）：經(jīng)尾靜脈注射入1ml PBS液至正常大鼠體內(nèi)。COPD組（B組）：經(jīng)尾靜脈注射入1ml PBS液至CO

2、PD大鼠體內(nèi)。MSCs組（C組）：經(jīng)尾靜脈注射入被 CM-Dil標(biāo)記的 MSCs COPD大鼠體內(nèi)，量為1×106/1mlPBS；pcDNA3.1-MSCs組（D組）：經(jīng)尾靜脈注射入被CM-Dil標(biāo)記的pcDNA3.1-MSCs至COPD模型大鼠體內(nèi)，量為106/1mlPBS；bFGF-pcDNA3.1-MSCs組（E組）：經(jīng)尾靜脈注射入被CM-Dil標(biāo)記的bFGF-pcDNA3.1-MSCs至COPD大鼠體內(nèi)，量為1×106/1mlP

3、BS。各組大鼠分別在D7、D14、D28處死，HE染色觀察COPD病理改變，ELISA檢測(cè)外周血IL-10、IL-4炎癥因子的水平，qRT-PCR法檢測(cè)肺組織中IL-10、IL-4mRNA的表達(dá)；CM-Dil標(biāo)記聯(lián)合冰凍切片免疫熒光染色法檢測(cè)MSCs在肺組織中的分化情況。
　　結(jié)果：
　　1.提取、培養(yǎng)的MSCs，流式細(xì)胞術(shù)表型鑒定結(jié)果：CD29（99.1％）、CD44（43.6%）高表達(dá)，CD34（1.8%）、CD45（1

4、.5%）低表達(dá)；
　　2. bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果與數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)表的一致，bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法成功轉(zhuǎn)染MSCs，bFGF在體內(nèi)高表達(dá)；
　　3. HE染色病理學(xué)檢測(cè)，C組、D組、E組均較B組，病理改變明顯改善， E組較C組、D組病理改變相對(duì)明顯；提示bFGF轉(zhuǎn)染MSCs對(duì)大鼠 COPD病理改變有改善作用。
　　4.在相同時(shí)間節(jié)點(diǎn)，C、D、E三組外周血及肺組織中的IL-10、IL-4

5、表達(dá)高于B組（均 P<0.05），C、D、E三組相比，C、D組外周血及肺組織中的IL-4、IL10水平差別不大，但E組較之二者相對(duì)較高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。隨著時(shí)間推移，C、D、E各組中外周血及肺組織中的IL-10、IL-4表達(dá)水平均升高，提示抗炎作用增強(qiáng)。
　　5. CM-Dil染色聯(lián)合免疫熒光染色提示：第28天，在C、D、E組的肺組織切片中，部分 CM-Dil陽(yáng)性細(xì)胞同時(shí)SPC或 CC16表達(dá)陽(yáng)性，提示外源性MSCs