重慶漢族人群CD36基因rs1761667和rs3173798位點(diǎn)多態(tài)性與冠心病的易感性研究.pdf

1、背景:冠心病(coronary heart disease，CHD)是心血管疾病高患病率、高致死率的主要因素之一。近期有研究認(rèn)為，大多數(shù)冠心病患者都有家族史，遺傳因素在其發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮一定的作用，然而冠心病的遺傳危險(xiǎn)因素尚未完全確定。CD36是B類清道夫受體家族中的一員，已經(jīng)被證實(shí)是(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)的高親和力受體，具有束縛和吞噬ox-LDL的作用，在動(dòng)脈粥樣硬化(athe

2、rosclerosis，AS)的發(fā)展的過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。AS是冠心病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，因此CD36可能在冠心病發(fā)病中發(fā)揮一定的作用。有研究表明冠心病患者CD36表達(dá)水平顯著升高，且在一定程度上反映了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度。迄今為止人類CD36基因已有1372個(gè)多態(tài)位點(diǎn)被報(bào)道，其中，rs5956、rs3173798、rs3211892等位點(diǎn)多態(tài)性已在CHD患者人群中被探討，結(jié)論尚存在不一致性;而rs1761667、rs152748

3、3、rs1049673和rs3211931等位點(diǎn)多態(tài)性與疾病的關(guān)聯(lián)性研究幾乎集中在探討它們與2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)和代謝綜合征(metabolic syndrome，MetS)等疾病的相關(guān)性上，與CHD的關(guān)聯(lián)性尚無(wú)研究報(bào)道。此外，上述大多數(shù)研究是在歐洲人群中進(jìn)行的。
　　目的:探討重慶地區(qū)漢族人群中CD36基因rs1761667和rs3173798單核苷酸多態(tài)性(single nuc

4、leotide polymorphisms，SNPs)與CHD的易感性，為冠心病病因的揭示提供一定的依據(jù)。
　　方法:根據(jù)入選標(biāo)準(zhǔn)，選取CHD患者112例和非CHD患者129例，分別入選冠心病組（CHD組）和對(duì)照組（Control組）。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)(polymerase chainreaction-restrictionfragment length polymorphism analysis,PC

5、R-RFLP)檢測(cè)rs1761667和rs3173798兩位點(diǎn)的基因型和等位基因分布;采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測(cè)定血漿ox-LDL濃度;采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qPCR)檢測(cè)CD36 mRNA表達(dá)水平。采用Logistic回歸篩選CH

6、D發(fā)病的危險(xiǎn)因素;采用比值比（odds ratios，OR）和95％可信區(qū)間(confidence interval, CI)表示CD36基因多態(tài)性與CHD發(fā)生的關(guān)聯(lián)性;所有統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均由統(tǒng)計(jì)軟件包PASW18(WinWrap(@)Basic，USA)完成。采用Quanto1.2.4軟件對(duì)與CHD有關(guān)聯(lián)的位點(diǎn)進(jìn)行樣本量的檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1.rs1761667位點(diǎn)在CHD組和Control組存在多態(tài)性，存在GG、AG和

7、AA三種基因型，其基因型頻率在CHD組和Control組分別為38.39％、53.57％、8.04％和49.61％、37.21％、13.18％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.034），其中CHD組的AG基因型分布頻率顯著高于Control組(P=0.011)。G和A等位基因在CHD組和Control組中的分布頻率分別為65.18％、34.82％和68.22％、31.78％，分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.480)。
　　2.rs31737

8、98位點(diǎn)在CHD組和Control組存在多態(tài)性，存在TT、CT和CC三種基因型，其基因型頻率在CHD組和Control組分別為36.61％、42.86％、20.53％和41.54％、40.00％、18.46％，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.732)。單個(gè)基因型在CHD和Control兩組之間的比較均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。T和C等位基因在CHD組和Control組中的分布頻率分別為58.04％、41.96％和61.54％、38.46％，

9、分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.433）。
　　3.CHD組血漿ox-LDL水平（646.24±369.99μg/L）顯著高于Control組血漿ox-LDL水平（555.91±283.68μg/L），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.037)。在CHD患者中，rs1761667位點(diǎn)不同基因型攜帶者血漿ox-LDL水平具有顯著差異(P=0.010);攜帶基因型AG的CHD患者血漿ox-LDL水平（741.38±418.39μg/L）顯著高于攜

10、帶基因型GG和AA的CHD患者血漿ox-LDL水平（分別為551.01±271.41μg/L,P=0.009;386.35±201.52μg/L,P=0.034）;攜帶基因型GG和AA的CHD患者血漿ox-LDL水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.523)。
　　4.在CHD組和Control組中，分別隨機(jī)抽取攜帶rs1761667位點(diǎn)GG、AG、AA三種不同基因型的研究對(duì)象各7例，采用qPCR檢測(cè)CD36 mRNA水平發(fā)現(xiàn)，CHD患者mR

11、NA表達(dá)水平（2.21±1.55）顯著高于Control組（1.36±1.01），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001);CD36 mRNA水平在攜帶rs1761667位點(diǎn)不同基因型的CHD患者中存在顯著差異(P=0.018)，其中攜帶AG基因型的CHD患者CD36mRNA水平（2.86±1.70）顯著高于攜帶AA基因型的CHD患者（1.53±0.78，P=0.005），攜帶GG基因型的患者CD36 mRNA水平（2.24±1.72）與攜

12、帶AG或AA基因型的患者CD36 mRNA水平無(wú)明顯差異(P分別為0.173和0.125)。
　　5.Logistic回歸分析篩選CHD危險(xiǎn)因素顯示，rs1761667位點(diǎn)基因型AG、年齡、血漿低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)水平、吸煙史、CHD家族史最終進(jìn)入預(yù)測(cè)方程（P＜0.05）:Logit(P)=Ln[P/(1-P)]=0.849（基因型AG）+0.027（年齡）+0.365(LDL)+

13、1.314（吸煙史）+1.327（CHD家族史）-3.711，其中，P為發(fā)生事件（患CHD）的概率，P≥0.5代表CHD患病，P＜0.5代表CHD不患病。該Logistic回歸分析預(yù)測(cè)模型的精確度、敏感度、特異度和約登(Youden)指數(shù)分別為65.98％、54.05％、76.15％和0.302。經(jīng)多因素分析后，rs1761667位點(diǎn)基因型AG仍能增加CHD患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.337,95％CI=1.336-4.087,P=0.003)

14、。
　　6.在冠心病患者病變血管支數(shù)1支、2支、3支及多支四組中，rs1761667位點(diǎn)三種基因型GG、AG和AA的分布頻率分別為32.72％、54.55％、12.73;43.33％、53.34％、3.33％;44％、52％、4％和50％、50％、0，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.683)。單個(gè)基因型在該四組之間比較均未見明顯差異(P＞0.05)。等位基因G、A在四組中的分布頻率分別為60％、40％;70％、30％;70％、30％和7

15、5％、25％，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.458）。
　　7.攜帶rs1761667位點(diǎn)不同基因型的CHD患者間甘油三酯(triglyceride，TG)水平、總膽固醇(total cholesterol，TC)水平、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)水平、LDL水平和體質(zhì)指數(shù)(body mass index，BMI)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　8.采用Quanto1.2.4軟