甲型H1N1流感病毒致宿主細胞氧化損傷機制的研究.pdf

1、廣州醫(yī)學院碩士學位論文甲型H1N1流感病毒致宿主細胞氧化損傷機制的研究姓名：馬紅梅申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：肖洪廣2011-05廣州醫(yī)學院碩士學位論文 甲型 H1N1 流感病毒致宿主細胞氧化損傷機制的研究 3 為氧化損傷修復酶參與 DNA 過度氧化修復過程， 可能在流感病毒致宿主細胞凋亡發(fā)生發(fā)展的過程中起到一定的作用。 目前國際上對流感病毒感染后宿主細胞 DNA 氧化損傷機制的研究鮮有報道， 本研究將從 DNA 氧

2、化損傷修復方面探討流感病毒致病機制。 目的 本課題在流感病毒感染宿主細胞可導致脂質(zhì)氧化損傷和 DNA 堿基氧化損傷的基礎上，進一步探討其可能的作用機制。揭示流感病毒致宿主細胞的氧化損傷在宿主細胞凋亡中的作用， 即 DNA 的過度氧化損傷而氧化修復酶的表達不足以對抗過高的氧化損傷，最終導致宿主細胞的凋亡和癥狀的發(fā)生發(fā)展。本研究旨在加強對流感病毒致宿主細胞氧化應激機制的認識，為該病毒致病機理研究提供了新的思路，為抗流感藥物的開發(fā)提供新的靶點

3、，也為高致病性人禽流感的預防、防控提供了新的視角和依據(jù)。 方法 第一部分 流感病毒感染細胞模型的建立 采用細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng) MDCK 細胞。雞胚尿囊腔接種 H1N1 型流感病毒，經(jīng)病毒復制、 擴增、 收獲病毒， 通過檢測 MDCK 細胞的半數(shù)組織細胞感染劑量 （TCID50） ，確定該毒株實驗用毒劑量。 第二部分 流感病毒 H1N1 感染細胞后 MTH1 基因表達的研究 細胞培養(yǎng)后提取總 R N A ，經(jīng)優(yōu)化 R T - P C R 反

4、應檢測細胞內(nèi) M T H 1 基因的表達量。條帶經(jīng) Scion Immage 軟件分析并與內(nèi)參基因 G A P D H 相比，對體系的準確性、重復性和靈敏度進行分析。MDCK 細胞培養(yǎng)后，H1N1 型流感病毒感染 0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h，在各時間點進行檢測：經(jīng) RT- PCR 反應檢測細胞內(nèi) MTH1 基因的相對表達量。 第三部分 流感病毒 H1N1 感染細胞后 OGG1 基因的表達