優(yōu)化MARCM條件實現(xiàn)水平運動視覺神經(jīng)元的單細胞標記.pdf

1、MARCM是一項基于遺傳學(xué)的單細胞標記技術(shù)，在1999年由Tzumin Lee和Liqun Luo發(fā)明。它通過FLP/FRT介導(dǎo)的基因重組，實現(xiàn)了純合突變細胞的正向標記。MARCM發(fā)展至今，已經(jīng)被應(yīng)用在很多領(lǐng)域：神經(jīng)元的單細胞標記；單個細胞的譜系分析；在健康個體上實現(xiàn)純合突變來研究基因的功能。MARCM把基因操作和神經(jīng)研究提高到了單細胞水平，推動了神經(jīng)科學(xué)的快速發(fā)展。在技術(shù)上，早期的MARCM只用于單色標記，現(xiàn)在在MARCM的基礎(chǔ)上發(fā)展

2、的嵌合體技術(shù)已經(jīng)實現(xiàn)了雙色和多色標記。
　　果蠅中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有一種細胞稱為神經(jīng)母細胞，神經(jīng)母細胞不對稱分裂會產(chǎn)生一個新的神經(jīng)母細胞和一個神經(jīng)節(jié)母細胞。在神經(jīng)母細胞發(fā)育進入有絲分裂時熱激活FLP，可以得到一個綠色熒光標記的神經(jīng)母細胞或者神經(jīng)節(jié)母細胞。當不被標記的神經(jīng)節(jié)母細胞處于有絲分裂時，激活FLP重組酶，則其產(chǎn)生的兩個神經(jīng)元中，有一個神經(jīng)元被綠色熒光標記，所以會得到一個被標記的單細胞克隆。細胞的發(fā)育時間是得到單細胞克隆的重要條件

3、。本文把處女果蠅與雄性果蠅放入果蠅管內(nèi)進行交配，當雌性果蠅開始產(chǎn)卵的時候，每隔2個小時把果蠅轉(zhuǎn)移到新果蠅管中。在果蠅卵發(fā)育50-70小時內(nèi)，每隔兩個小時熱激活FLP。在不同時間段內(nèi)激活FLP時，統(tǒng)計MARCM對LPTCs神經(jīng)元單細胞標記的效率。實驗結(jié)果表明當果蠅卵發(fā)育60-62小時熱激活FLP，MARCM對VS神經(jīng)元進行單細胞標記的效率最高。當果蠅卵發(fā)育52-56小時熱激活FLP，MARCM對HS神經(jīng)元進行單細胞標記的效率最高。