斑蝥質量分析與毒性研究.pdf

1、斑蝥Mylabris為芫菁科昆蟲南方大斑蝥MylabrisphalerataPallaus或黃黑小斑蝥MylabriscichoriiLinnacus的干燥體.始載于《神農本草經》,具有破血消癮,功毒蝕瘡,引赤發(fā)泡的功效.由于其毒性大,中醫(yī)臨床內服均需炮制后入藥。本研究以提高斑蝥臨床用藥安全性、有效性和可控性為目的,對斑蝥及其炮制品的質量、毒性以及成分活性進行了較深入的探討,主要內容和結果如下:
　　 一、不同產地斑蝥及其炮制品

2、中斑蝥素的含量分析
　　 1.建立了斑蝥中主成分斑蝥素的HPLC定量方法,比較了不同產地、不同品種、不同部位斑蝥飲片中斑蝥素的含量。結果表明:5個產地藥材斑蝥素含量0.90％～1.17％平均含量為1.01％;斑蝥品種間含量差異不明顯;斑蝥素主要集中在斑蝥胸腹部,頭足翅部位很少;斑蝥炮制后斑蝥素含量降低。
　　 2.改進了斑蝥素提取工藝,結果表明:采用氯仿加鹽酸提取得到的總斑蝥素含量為單獨用氯仿提取得到的游離斑蝥素含量的1

3、.85倍,提示總斑蝥素含量更能反應出藥材內在的毒效與質量。
　　 二,斑蝥油脂活性研究及成分分析
　　 1.抗腫瘤活性研究對斑蝥石油醚部位進行體內外抗腫瘤活性研究,結果表明:斑蝥油脂對人肝癌細胞(SMMC-7721、HepG2)有明顯的增殖抑制作用,IC50分別為0.25、1.72,接近陽性藥5-Fu.在體內與化藥(CTD)合用,對H22荷瘤小鼠有明顯的抗腫瘤作用,抑瘤率達到74.81％,且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。

4、　　 2.油脂組成分析運用GC-MS對斑蝥石油醚部位的成分進行了定性分析,結果顯示:共分離鑒定出10種脂肪酸成分,其中飽和脂肪酸7種,占33％,分別為:肉豆蔻酸、棕櫚酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸,花生酸、山崳酸.不飽和脂肪酸3種,占67％,分別為:棕櫚油酸、油酸、亞油酸。
　　 3.多脂肪酸成分的GC含量測定以棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、花生酸為指標性成分,同時測定了斑蝥飲片炮制前后這7種脂肪酸成分的含量

5、。結果顯示:7種脂肪酸含量存在一定產地差異性,炮制對成分種類和含量沒有影響。含量測定方法準確、可靠,為建立斑蝥多指標含量測定方法提供依據(jù)。
　　 三、毒性研究
　　 1.豚鼠皮膚刺激性實驗以發(fā)泡時間、發(fā)泡率、發(fā)泡大小為指標,觀察斑蝥炮制前后對豚鼠皮膚的毒性反應。結果表明:斑蝥炮制后毒性降低,但仍存在皮膚毒性,斑蝥素引起豚鼠皮膚發(fā)泡的最低劑量為20μg.
　　 2.小鼠急性毒性實驗以LD50值及病理切片為指標,評價

6、斑蝥炮制前后的毒性大小。結果顯示:小鼠灌胃給藥,生斑蝥LD50=112.79mg/kg,米斑蝥LD50=180.67mg/kg,表明斑蝥炮制后,毒性降低。
　　 3.小鼠亞急性毒性實驗以血清生化及病理切片為指標,觀察斑蝥不同劑量下對肝、腎的毒性表現(xiàn),探索中毒機理及毒性與斑蝥素含量的相關性。實驗結果顯示:斑蝥在大劑量下小鼠連續(xù)灌胃給藥2周,對腎臟產生明顯毒性,且對免疫系統(tǒng)造成抑制與損傷,在小劑量下小鼠連續(xù)灌胃給藥4周,未表現(xiàn)出明顯