陜北白絨山羊激素敏感脂酶（HSL）基因SNPs及其與部分性狀的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、本研究通過克隆限速脂肪酸分解反應(yīng)的西農(nóng)薩能羊乳腺激素敏感酯酶(HSL)基因編碼區(qū)序列(Codinng sequence，CDs)，并對(duì)其表達(dá)與遺傳變異進(jìn)行分析，以便進(jìn)一步探討脂肪酶調(diào)節(jié)脂肪分解機(jī)制及乳腺脂肪酸合成通路；通過分析HSL基因的單核苷酸多態(tài)性及其與部分性狀的相關(guān)關(guān)系，旨在為HSL基因作為陜北白絨山羊生長(zhǎng)發(fā)育候選基因研究提供試驗(yàn)依據(jù)。本研究主要包括以下內(nèi)容：(1)利用RT-PCR技術(shù)克隆HSL基因的CDs，并分析其同源性、信號(hào)肽

2、序列、跨膜結(jié)構(gòu)及三級(jí)結(jié)構(gòu)；(2)利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)HSL基因在整個(gè)泌乳期(初期、盛期、中期、后期、末期和干奶期)的表達(dá)量進(jìn)行分析；(3)利用PCR-SSCP、PCR-Sequencing技術(shù)分析陜北白絨山羊HSL基因部分外顯子1、外顯子2和外顯子8的遺傳變異。主要試驗(yàn)結(jié)果如下： (1)成功克隆西農(nóng)薩能羊乳腺HSL基因的CDs區(qū)，并登陸GenBank，收錄號(hào)為：EU273879。HSL基因CDs全長(zhǎng)2271 bp，編碼756

3、個(gè)氨基酸殘基，與牛(NM 001080220)、人(NM 005357)和鼠(B021642)的核苷酸同源性分別為96％，86％和79％；氨基酸的同源性分別為96％，85％和83％； (2)通過分析HSL基因在整個(gè)泌乳期表達(dá)水平的變化，發(fā)現(xiàn)HSL基因mRNA的表達(dá)豐度在泌乳初期、盛期表達(dá)水平很高，在泌乳中期下降至最低點(diǎn)，泌乳末期又逐漸升高，而從末期到干奶期又呈緩慢下降趨勢(shì)，與產(chǎn)奶量及乳脂率的變化規(guī)律不一致，HSL基因在乳成分合成

4、中的作用有待進(jìn)一步分析； (3)HSL基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：陜北白絨山羊群體在外顯子1、2、8位點(diǎn)均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)，其多態(tài)信息含量(PIC)分別為0.094 8、0.114 2、0.802 3，表明外顯子1、2位點(diǎn)處于低度多態(tài)水平、外顯子8處于高度多態(tài)水平。利用PCR-Sequencing法進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在外顯子1位點(diǎn)293 bp處存在“G_→A”突變，導(dǎo)致精氨酸(R)突變?yōu)榻M氨酸(H)，其基因型AB

5、和AA之間產(chǎn)絨性狀差異極顯著(P<0.01)，AA型和AB型之間體高和背膘厚兩性狀差異均達(dá)顯著水平(P<0.05)，而在其它性狀上AA型與BB型之間差異不顯著，在初生重、斷奶重、絨長(zhǎng)、周歲重、體高、體長(zhǎng)、管圍、背膘厚等性狀表現(xiàn)為AB型>AA型，而在毛長(zhǎng)、產(chǎn)絨量、胸圍、眼肌面積等性狀表現(xiàn)為AA型>AB型；在外顯子2位點(diǎn)上新發(fā)現(xiàn)640 bp處存在“C→A”的突變，但不引起氨基酸序列改變，其基因型AB和AA之間周歲重差異極顯著(P<0.01)

6、，在其它性狀上AA型與BB型之間差異不顯著，在斷奶重、絨長(zhǎng)、周歲重、體高、體長(zhǎng)、管圍、背膘厚等性狀上表現(xiàn)為AB型>AA型，在毛長(zhǎng)、產(chǎn)絨量、胸圍、眼肌面積等性狀上表現(xiàn)為AA型>AB型；外顯子8在1818 bp處存在“A→G”的突變，導(dǎo)致異亮氨酸(I)變?yōu)槔i氨酸(V)，其基因AA型和BB型之間，AB型和AA型之間均在陜北白絨山羊的眼肌面積和背膘厚兩個(gè)性狀上差異顯著(P<0.05)，AB型和BB型之間在產(chǎn)絨量性狀上差異顯著(P<0.05)，此