中空纖維液相微萃取-HPLC法測定比索洛爾血漿游離藥物濃度及蛋白結(jié)合率.pdf

1、目的：
　　 許多藥物進(jìn)入體內(nèi)可與血漿蛋白相結(jié)合，生成藥物-蛋白質(zhì)復(fù)合物。與血漿蛋白結(jié)合的藥物暫時(shí)失去活性，不能參與分布、代謝和消除。只有藥物的游離型分子才能從血液向組織轉(zhuǎn)運(yùn)，真正與藥理活性和毒副反應(yīng)密切相關(guān)，藥物的療效往往取決于其游離型濃度。當(dāng)游離型藥物隨著轉(zhuǎn)運(yùn)和消除使其濃度降低時(shí)，一部分結(jié)合型藥物就轉(zhuǎn)變成游離型藥物，使血漿及作用部位在一定時(shí)間內(nèi)保持一定的藥物濃度。血漿蛋白結(jié)合率是指血漿中的蛋白結(jié)合部分藥物所占總藥物量的百分率

2、，用于表征藥物與血漿蛋白的結(jié)合程度。血漿蛋白結(jié)合率影響藥物在體內(nèi)的分布、代謝與排泄，從而影響其作用強(qiáng)度和作用時(shí)間，是藥代動(dòng)力學(xué)研究中的重要參數(shù)之一。
　　 目前測定藥物游離濃度及血漿蛋白結(jié)合率的方法主要有兩種:平衡透析法及超濾法。平衡透析法操作繁瑣費(fèi)時(shí)，且大量透析液的加入稀釋了血漿樣品，可能會(huì)破壞原有的藥物-蛋白結(jié)合平衡，使測定結(jié)果失真;超濾法較平衡透析法簡便省時(shí)，但也存在一定弊端，如分離過程中藥物蛋白結(jié)合平衡不穩(wěn)定，超濾管價(jià)格

3、昂貴，分析成本較高等。
　　 1999年，Pedersen-Bjergaard等首次提出了以中空纖維為載體的液相微萃取(Hollow fiber-protected liquid phase microextraction，HF-LPME)的樣品前處理技術(shù)。即以多孔的中空纖維為微萃取溶劑的載體，它集采樣、萃取和濃縮于一體，具有簡便、快捷、消耗有機(jī)溶劑少，對(duì)環(huán)境污染小，萃取效率高，較高的富集率和靈敏度，易于與高效液相色譜(HPLC

4、)和毛細(xì)管電泳(CE)聯(lián)用等諸多優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)由于微萃取是在多孔的中空纖維腔中進(jìn)行，并不與樣品溶液直接接觸，從而避免了萃取溶劑的損失;而且由于大分子、雜質(zhì)等不能進(jìn)入纖維孔，因此還具有突出的樣品凈化功能，適用于復(fù)雜基質(zhì)樣品的直接分析。
　　 在本課題中，擬將中空纖維液相微萃取技術(shù)與高效液相色譜法結(jié)合，僅通過測定中空纖維腔內(nèi)藥物濃度即可同時(shí)計(jì)算出血漿游離藥物濃度及總藥物濃度，以建立一種簡便、快速、靈敏度高的測定比索洛爾血漿游離藥物濃度及

5、血漿蛋白結(jié)合率的新方法。
　　 材料和方法：
　　 將中空纖維截成8cm小段，用丙酮超聲5min，清洗中空纖維表面的雜質(zhì)。晾干揮去丙酮后將中空纖維浸泡在有機(jī)相（正辛醇）中5min，使其孔壁充滿有機(jī)相，用注射器向中空纖維腔內(nèi)注入適量空氣，排空腔內(nèi)多余的有機(jī)相。在腔內(nèi)注入2mol·L-1接受相（甲酸）20μL后，用加熱鑷子封閉兩端。
　　 取血漿樣品500μL，加入玻璃小瓶中，再加入美托洛爾標(biāo)準(zhǔn)品溶液50μL，用磷酸

6、鹽緩沖液將供體相稀釋至5.0mL。將封好兩端的中空纖維彎曲為U形完全浸入供體相中，加入轉(zhuǎn)子，在轉(zhuǎn)速為700rpm，37℃條件下萃取。25min后取出中空纖維，剪開兩端，取10μL接受相進(jìn)入HPLC分析。
　　 通過優(yōu)化中空纖維液相微萃取實(shí)驗(yàn)中的接受相pH值、萃取時(shí)間、萃取轉(zhuǎn)速等條件，確定了測定比索洛爾的血漿樣本的前處理?xiàng)l件，分別建立用于測定比索洛爾血漿游離藥物濃度及總藥物濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用中空纖維液相微萃取聯(lián)合高效液相色譜法(

7、HF-LPME-HPLC-FLD)測定比索洛爾在接受相中的藥物濃度，代入當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出比索洛爾血漿游離藥物濃度及總藥物濃度，進(jìn)而計(jì)算比索洛爾血漿蛋白結(jié)合率。
　　 結(jié)果：
　　 比索洛爾游離藥物濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線在5-125ng.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999)，在低、中、高三種濃度下測得比索洛爾的血漿蛋白結(jié)合率分別為31.2％,32.0％，31.8％。
　　 結(jié)論：
　　 所建方法簡便快速，重