水牛小腔卵泡的分離與小腔卵泡卵母細胞培養(yǎng)的初步研究.pdf

1、本研究主要通過探討水牛小腔卵泡分離的方法,并比較不同成熟培養(yǎng)液對水牛小腔卵泡卵母細胞體外培養(yǎng)效果的影響,以期建立有效的水牛小腔卵泡分離和小腔卵泡卵母細胞的體外培養(yǎng)體系。
　　 一、比較了不同的分離方法和酶作用的不同時間,以及不同的卵巢表面卵泡大小等因素對水牛小腔卵泡分離效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):采用機械與酶結(jié)合的方法分離水牛小腔卵泡時,平均每個卵巢獲得5.64個小腔卵泡,顯著高于機械法分離平均每個卵巢獲得的3.12個小腔卵泡數(shù)(P＜

2、0.05);當膠原蛋白酶作用12min或15min時,平均每個卵巢獲得的小腔卵泡數(shù)均顯著高于5min和10min處理組(P＜0.05),而12min與15min兩組之間沒有顯著差異(P＞0.05),但當消化時間延長到20min時,卵泡膜被酶消化而破裂,沒法分離到小腔卵泡;從表面具有小于2mm卵泡且無黃體的卵巢分離獲得的小腔卵泡平均數(shù)顯著高于表面無可見卵泡且有黃體的卵巢組的平均數(shù)(7.50vs2.25,P＜0.05)。
　　 二、

3、研究了在成熟培養(yǎng)液中添加不同濃度的FSI-I、LH、Activin對水牛小腔卵母細胞體外成熟的影響。結(jié)果顯示:(1)當LH濃度為0.5μg/mL時,FSH添加濃度為2μg/mL的小腔卵泡卵母細胞體外成熟率(26.61±2.33％)和孤雌激活的囊胚發(fā)育率(2.75±1.00％)均顯著高于其他各組(0,0.3,0.5和3μg/mL)(P＜0.5);(2)當FSH的濃度一定時(2μg/mL),隨著LH濃度的升高,水牛小腔卵泡卵母細胞體外成熟率

4、及激活后囊胚發(fā)育率也相應(yīng)提高,LH濃度為1μg/mL和2μg/mL時,小腔卵泡卵母細胞體外培養(yǎng)的成熟率(33.98±1.33％和32.97±4.33％)及孤雌激活后的囊胚率(5.83±1.33％和4.40±0.33％)顯著高于對照組(17.35±0.33％和0％)和0.5μh/mL組(26.32±2.33％和2.11±0.33％)(P＜0.05),但兩組間無顯著差異(P＞0.05);(3)在培養(yǎng)液中,添加不同濃度的Activin對卵母細

5、胞的體外成熟率無顯著影響(P＞0.05),但添加濃度為100ng/mL(13.27±0.33％)和150ng/mL(9.64±2.33％)處理組卵母細胞激活后的囊胚率顯著高于0ng/mL(5.81±1.33％)和50ng/mL(6.52±2.33％)組(P＜0.05),而前兩組間差異不顯著(P＞0.05)。
　　 上述結(jié)果表明,采用酶與機械結(jié)合的方法,膠原蛋白酶濃度為3mg/L,消化12～15min最合適,且表面小于2mm可見卵