大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌抑菌機制的研究.pdf

1、嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）和乙型鏈球菌（beta hemolytic streptococcus）是水產動物的常見致病菌，對人類健康和水產經濟帶來巨大威脅。由于抗生素的濫用，藥物殘留和耐藥性變得日益嚴重。人們迫切需要尋找不易產生耐藥性的，低毒的新型抗菌物質。本研究以70％乙醇提取的大黃（Rhubarb）為抑菌材料，從抑菌圈、最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）方面探討了大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙

2、型鏈球菌生長的影響。通過電子掃描顯微鏡、測定菌液中蛋白濃度變化、聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、蛋白質質譜鑒定（MS）、雙向凝膠電泳（2-DE）等方法研究了大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的抑制機制。
　　1、抑菌結果顯示，大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的抑制效果明顯，其抑菌圈大小分別為24.5±0.2mm和23.0±0.2mm。大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的MIC和MBC都是3.91mg/mL。

3、　　2、應用了掃描電鏡觀察大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的細胞壁、細胞膜的作用。結果發(fā)現，經1/2MIC大黃醇提物處理后，嗜水氣單胞菌菌體表面變粗糙，出現裂解并且菌液的蛋白含量明顯升高；乙型鏈球菌菌體表面雖然皺褶，但是形態(tài)依然完整，菌液中的蛋白含量也沒有明顯變化。說明大黃醇提物對嗜水氣單胞菌的細胞壁和細胞膜有一定的破壞作用，而對乙型鏈球菌的細胞壁和細胞膜影響很小。
　　3、通過SDS-PAGE和可溶性蛋白含量測定分析大黃醇提

4、物對細菌蛋白表達的作用，結果表明：1）經大黃醇提物處理后，嗜水氣單胞菌的蛋白表達量在4 h時產生明顯變化（P<0.05），再經2-DE電泳進行特異性蛋白的分離，并用質譜鑒定，發(fā)現了三個差異性蛋白：分別為轉錄延長因子GreA（transcription elongation factor GreA），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase），烷基氫過氧化物還原酶亞基C（alkyl hydroperoxide reduct

5、ase subunit C），這3個蛋白對細菌的正常生理及其結構極為重要。2）經大黃醇提物處理后，乙型鏈球菌蛋白表達量受到的影響不明顯，但SDS-PAGE圖譜上，發(fā)現了多條缺失條帶。通過2-DE電泳進行特異性蛋白的分離，并用質譜鑒定了這些差異性蛋白分別為磷酸丙酮酸水合酶（phosphopyruvate hydratase）、丙酮酸脫氫酶E1（pyruvate dehydrogenase(acetyl-transferring)E1）、磷

6、酸甘油變位酶（phosphoglyceromutase）、磷酸甘油酸激酶（phosphoglycerate kinase[Bacilli]）、3-磷酸甘油醛脫氫酶（type Iglyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase[Bacilli]）、轉酮醇酶（transketolase）、氨基甲酸激酶1（carbamate kinase1）、蛋白核糖體蛋白S2（30S ribosomal protein S2

7、[Bacilli]）、60kD伴侶蛋白（60kD chaperonin）和假定蛋白（hypothetical protein）。通過查閱文獻可知，前7種酶是微生物糖酵解、氨基酸代謝及戊糖磷酸途徑中必須的；蛋白核糖體蛋白S2和60KD伴侶蛋白主要與蛋白合成和折疊有關；而假定蛋白具體功能未知。
　　綜上所述，大黃醇提物能有效抑制嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的生長。但作用方式不同，大黃醇提物對嗜水氣單胞菌的抑制機制是破壞細胞膜的完整性和影響