源嗜水氣單胞菌致病性和疫苗的研究.pdf

1、大黃魚是具有很高經(jīng)濟價值的海洋魚類,產(chǎn)于我國南方。與其相關(guān)的細菌病害如弧菌病,愛德華氏病,敗血病等已經(jīng)報道,但氣單胞菌感染的報道鮮見。從患敗血病的大黃魚體內(nèi)不同組織分離出5株菌,分兩個類型:嗜水氣單胞菌和豚鼠氣單胞菌。它們的生物學(xué)特性本文已描述。被感染的魚出現(xiàn)食欲下降或停止進食、游動遲緩、水面浮游等癥狀。檢查瀕死和死亡不久的魚體發(fā)現(xiàn)腹部有微小出血斑,背鰭根部肌肉潰爛,肛門腫大,肝臟貧血等病灶。人工感染表明這些癥狀系氣單胞菌屬的嗜水氣單胞

2、菌(Aeromonas hydrophila)和豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)所致。隨著大黃魚養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大,此二菌引起的病害應(yīng)得到足夠的重視。
　　培養(yǎng)分離菌后再進行人工感染試驗分析該二菌的毒性。兩種分離菌經(jīng)普通NB與改良NB培養(yǎng)后,將它們胞外物產(chǎn)物(ECPs)組合成三種注射物(A. hydrophila&A. caviae;A. hydrophila;A. caviae),分別注射到分組后的大黃魚和鯔魚體內(nèi)

3、,觀察五天,計算累積死亡率。用t-test檢驗分析不同組之間死亡差異性。大黃魚死亡率的t-test檢驗結(jié)果顯示:嗜水氣單胞菌與豚鼠氣單胞菌混菌致病力顯著強于它們單菌注射(P<0.000001 for A. hydrophila or P<0.005 for A. caviae);嗜水氣單胞菌顯著(P<0.005)強于豚鼠氣單胞菌;改良NB培養(yǎng)的二者ECPs混合物致死率顯著(P<0.05)高于豚鼠氣單胞菌ECPs;嗜水氣單胞菌ECPs致死

4、率顯著(P<0.0005 for mNB, P<0.05 for NB)高于豚鼠氣單胞菌ECPs;ECPs注射試驗中改良NB與普通NB之間死亡率無顯著差異;活菌混合物致死力顯著強于ECPs(P<0.05 for mNB,P<0.005 for NB)混合物的致死力;嗜水氣單胞菌活菌致死力顯著高于其ECPs致死力(P<0.05 for mNB or NB);豚鼠氣單胞菌與其ECPs致死力無顯著(P>0.05)差異性。鯔魚t-test檢驗結(jié)

5、果與大黃魚類似,但是有兩點明顯不同于大黃魚。第一,改良NB培養(yǎng)的嗜水氣單胞菌ECPs致死力顯著(P>0.05)強于普通NB;第二,嗜水氣單胞菌活菌與改良NB培養(yǎng)的嗜水氣單胞菌ECPs的致死力無顯著(P>0.05)差異。
　　人工感染證明這兩種菌都可使大黃魚和鯔魚致死,但是嗜水氣單胞菌的毒性更強,而兩種活菌混合物的致死率高于嗜水氣單胞菌單獨感染,甚至高于兩種菌單獨感染致死率的總合。如在菌濃度為106 cfu/ml下,注射活菌混合物時

6、大黃魚死亡率為71.4,而嗜水氣單胞菌與豚鼠氣單胞菌單獨感染致死率的總合僅有42.9％。另一方面,從t-test檢驗結(jié)果也可以看出A. hydrophila&A. caviae協(xié)同作用提高大黃魚死亡率,這暗示著嗜水氣單胞菌和豚鼠氣單胞菌在宿主體內(nèi)環(huán)境下存在某種機制而提高了二者整體的致病力。T-test檢驗結(jié)果還顯示對于鯔魚來說,改良NB培養(yǎng)的嗜水氣單胞菌ECPs比普通NB培養(yǎng)的毒性更強,說明改良NB更有助于嗜水氣單胞菌胞外毒素的分泌。我

7、們還可以看見對于鯔魚來說嗜水氣單胞菌活菌感染與改良NB培養(yǎng)的嗜水氣單胞菌的ECPs致死率無顯著差異,說明改良NB的培養(yǎng)條件比普通NB更接近宿主體內(nèi)環(huán)境。
　　運用不同的方法制備疫苗,包括福爾馬林滅活疫苗(FKC)和超聲滅活疫苗(UKC)。在超聲滅活疫苗制備過程中,各組菌懸液中添加了不同的輔助劑,分別為PEG6000+EDTA、PEG200+EDTA、DMSO+EDTA、EDTA。結(jié)果發(fā)現(xiàn) PEG6000+EDTA超聲滅活時間短、滅