NeurexinⅡ基因在大鼠及不同胎齡大鼠胚胎腸神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:腸神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric nervous system，ENS)是由分布于消化道管壁內(nèi)的神經(jīng)元及神經(jīng)纖維組成的內(nèi)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，接受中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervoussystem，CNS)的調(diào)節(jié)，但相對(duì)獨(dú)立的調(diào)節(jié)胃腸道的運(yùn)動(dòng)、消化等各項(xiàng)功能。ENS由神經(jīng)嵴細(xì)胞發(fā)育形成，多種基因在其發(fā)育形成過程中發(fā)揮重要作用，如RET基因、SOX10基因、GDNE基因等。腸神經(jīng)元發(fā)育異常性疾病(Neuronal intestinalmalf

2、ormations，NIM)是一類常見且嚴(yán)重危害患兒健康水平的消化道畸形，以消化管壁神經(jīng)分布及功能異常為主要特征，是多種因素影響ENS發(fā)育，最終導(dǎo)致ENS神經(jīng)細(xì)胞在數(shù)量、質(zhì)量、分布及功能上異常的不同結(jié)局，其病因尚未完全闡明。NIM主要包括先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung's disease，HD)、腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)育不良(Intestinal neuronal dysplasia,IND)、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞減少癥(Hypoganglion

3、osis，HG)、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞未成熟(Immaturity of ganglion cells，IGC)、混合畸形及未分類的腸神經(jīng)發(fā)育不良。研究證實(shí)Neurexins在CNS中廣泛表達(dá)，且在功能性突觸的發(fā)生、分化、成熟及維持功能發(fā)面均發(fā)揮重要作用;我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，Neurexins亦在ENS中廣泛表達(dá)，與胃腸動(dòng)力紊亂性疾病如HD有密切關(guān)系，Neurexins、其配體Neuroligins及相關(guān)的神經(jīng)介質(zhì)谷氨酸與γ-GABA異常是受累

4、腸管蠕動(dòng)功能障礙的重要原因。據(jù)此，實(shí)驗(yàn)通過不同實(shí)驗(yàn)方法對(duì)胎齡16天、18天、20天的大鼠胚胎及出生24小時(shí)內(nèi)的乳鼠（E16組、E18組、E20組、Ep0組）及部分成年大鼠結(jié)腸ENS中NeurexinⅡ基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，探討NeurexinⅡ基因與ENS發(fā)育的相關(guān)關(guān)系及NeurexinⅡ基因與NIM的可能關(guān)系。
　　方法:對(duì)清潔級(jí)健康的Wistar雌性與雄性大鼠進(jìn)行隨機(jī)配組，單獨(dú)交配使雌鼠受孕，受孕后在相同條件下單獨(dú)飼養(yǎng)至相應(yīng)孕齡

5、，麻醉并處死孕齡16、18和20天孕鼠、出生24小時(shí)內(nèi)乳鼠，解剖獲取胚胎第16、18、20天和出生24小時(shí)內(nèi)及部分成年大鼠臨近回盲部、長度1.0cm左右的結(jié)腸全層組織標(biāo)本。對(duì)成年大鼠結(jié)腸標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)DAB染色，觀察NeurexinⅡα蛋白在ENS中的表達(dá)及表達(dá)部位;運(yùn)用免疫組織化學(xué)DAB染色、Western blot及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)胎齡16、18、20天大鼠胚胎和出生24小時(shí)內(nèi)乳鼠結(jié)腸標(biāo)本中NeurexinⅡα蛋白及Ne

6、urexinⅡmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:免疫組織化學(xué)DAB染色結(jié)果顯示NeurexinⅡα蛋白陽性染色成棕黃色或黃褐色，主要表達(dá)于ENS肌間神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，在黏膜下層及黏膜層亦有少量表達(dá);其達(dá)量隨胚胎發(fā)育自胚胎第16天至出生后第一天逐漸增加。Westernblot實(shí)驗(yàn)顯示NeurexinⅡα蛋白在E16、E18、E20和Ep0各組結(jié)腸全層組織提取總蛋白中的相對(duì)含量分別為0.054±0.009、0.106±0.020、0.215

7、±0.013、0.280±0.030，隨胚胎發(fā)育NeurexinⅡα蛋白表達(dá)逐漸增加，組間比較與兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與免疫組化DAB染色結(jié)果所示趨勢(shì)一致。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在E16、E18、E20和Ep0各組結(jié)腸標(biāo)本中NeurexinⅡmRNA相對(duì)表達(dá)依次為0.390±0.029、0.552±0.054、0.748±0.065、1.000±0.000，與其在蛋白水平的表達(dá)趨勢(shì)一致，組間比較與兩兩比較