版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領
文檔簡介
1、研究目的:
高滴度抗β2GPI抗體(anti-β2-glycoprotein I antibody,anti-β2GPI Ab)是抗磷脂綜合征(antiphospholipid syndrome,APS)患者血清中的獨立危險因素,增加了APS患者中血栓形成和反復流產(chǎn)的危險??功?GPI抗體能夠誘導單核細胞、血管內(nèi)皮細胞表達組織因子、粘附分子、腫瘤壞死因子等眾多細胞因子,從而引發(fā)炎癥、高凝等病理過程,參與APS的致病機制。本課題
2、組前期研究表明,TLR4能夠促進β2GPI刺激的小鼠骨髓來源樹突狀細胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)的活化和成熟;有利于β2GPI免疫小鼠引起Th細胞向Th2細胞分化。然而,對于TLR4在B細胞發(fā)揮的自身免疫反應和APS相關(guān)抗體產(chǎn)生過程中的作用仍需進一步的探究。本文在前期研究和相關(guān)文獻報道的基礎上,通過比較TLR4缺陷組(C3H/HeJ)小鼠和TLR4正常組(C3H/HeN)小鼠經(jīng)
3、β2GPI免疫后抗體效價、B細胞活化相關(guān)指標以及相關(guān)炎癥分子和脾臟生發(fā)中心等差異,探討TLR4在β2GPI免疫小鼠脾臟B細胞活化中作用。
研究方法:
(1)酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA):用于檢測經(jīng)β2GPI、BSA和NS免疫的C3H/HeN小鼠(TLR4表達正常)和C3H/HeJ小鼠(TLR4表達缺陷)血清中的抗β2GPI抗體的效價。
(
4、2) HE染色:檢測分別經(jīng)β2GPI、BSA和NS免疫的C3H/HeN小鼠(TLR4表達正常)和C3H/HeJ小鼠(TLR4表達缺陷)脾臟生發(fā)中心的個數(shù)及大小的變化。
(3)免疫組織化學:檢測分別經(jīng)β2GPI、BSA和NS免疫的C3H/HeN小鼠(TLR4表達正常)和C3H/HeJ小鼠(TLR4表達缺陷)脾臟生發(fā)中心CD40L的表達。
(4)實時熒光定量PCR(Real-time quantitative PCR,R
5、T-qPCR):分別檢測經(jīng)β2GPI、BSA和NS免疫的C3H/HeN小鼠(TLR4表達正常)和C3H/HeJ小鼠(TLR4表達缺陷)脾臟B細胞中IL-6和IL-10在 mRNA水平的表達。
(5)為進一步探討TLR4在小鼠脾臟組織BAFF表達中的作用,本研究分別用RT-qPCR和Western blot檢測經(jīng)β2GPI、BSA和NS免疫的C3H/HeN小鼠(TLR4表達正常)和C3H/HeJ小鼠(TLR4表達缺陷)脾臟組織中
6、BAFF的表達(mRNA和蛋白水平)。
(6)流式細胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM):為探究TLR4在β2GPI免疫的B細胞活化中的作用,本研究采用流式細胞術(shù)檢測經(jīng)β2GPI、BSA和NS免疫的C3H/HeN小鼠(TLR4表達正常)和C3H/HeJ小鼠(TLR4表達缺陷)脾臟B細胞中CD80、CD86、CD40及MHCII的表達。
研究結(jié)果:
(1)經(jīng)β2GPI免疫后,C3H/HeN小鼠和C3
7、H/HeJ小鼠血清中均出現(xiàn)高效價的抗β2GPI抗體,C3H/HeN小鼠的抗β2GPI抗體效價(>1:100,000)高于C3H/HeJ小鼠(1:100,000),并且每個稀釋點的A值均高于C3H/HeJ小鼠。BSA免疫及NS處理組未見抗β2GPI抗體的產(chǎn)生。
(2)經(jīng)β2GPI刺激后的小鼠脾臟生發(fā)中心,較BSA刺激組和生理鹽水組更大更多,并且C3H/HeN小鼠的生發(fā)中心的數(shù)量和大小都高于C3H/HeJ小鼠。
(3)β
8、2GPI免疫的C3H/HeN小鼠脾臟組織中,BAFF在mRNA和蛋白水平上的表達量均高于β2GPI免疫的C3H/HeJ小鼠。
(4)β2GPI刺激的C3H/HeN小鼠CD40和CD40L的表達明顯增高,與相同處理的C3H/HeJ小鼠有顯著差異(p<0.01, p<0.05)。
(5) C3H/HeN小鼠經(jīng)β2GPI刺激后, C3H/HeN小鼠脾臟B細胞(CD19+)中CD80、CD86和MHCII表達明顯升高,與相同
9、處理的C3H/HeJ小鼠有顯著差異(p<0.05)。
(6)在β2GPI誘導的C3H/HeN小鼠模型中,與相同處理的C3H/HeJ小鼠相比, C3H/HeN小鼠脾臟B細胞產(chǎn)生更多的炎癥因子(IL-6和 IL-10)。
結(jié)論:
(1)β2GPI免疫小鼠產(chǎn)生特異性抗β2GPI抗體:β2GPI免疫的小鼠B細胞活化各項指標均高于無關(guān)抗原蛋白(BSA)免疫的小鼠,并產(chǎn)生高效價的抗β2GPI抗體。
(2) T
10、LR4促進抗β2GPI抗體的產(chǎn)生:與C3H/HeJ小鼠相比,β2GPI免疫的C3H/HeN小鼠產(chǎn)生更高效價的抗β2GPI抗體。
(3) TLR4促進β2GPI誘導的小鼠B細胞活化:C3H/HeN小鼠經(jīng)β2GPI刺激后,脾臟生發(fā)中心的個數(shù)變多,面積變大;脾臟組織中BAFF的表達增強;B細胞共刺激分子(CD80,CD86,MHCII)和 B細胞炎癥因子(IL-6和 IL-10)的表達上調(diào),且均高于β2GPI免疫的C3H/HeJ小鼠
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- TLR4在β2GPI誘導的小鼠骨髓來源樹突狀細胞成熟過程中的作用探討.pdf
- TLR4在anti-β2GPI-β2GPI復合物誘導THP-1細胞表達TF中的作用探討.pdf
- TLR4-NF-κB通路在oxLDL-β2GPI-anti-β2GPI復合物誘導小鼠巨噬細胞泡沫化中的作用探討.pdf
- TLR2在β2GPI-抗β2GPI復合物刺激小鼠腹腔巨噬細胞過程中的作用探討.pdf
- TLR4在抗β2GPI抗體誘導小鼠血管黏附分子及組織因子表達中的作用探討.pdf
- TLR4促進ox-LDL-β2GPI-抗β2GPI抗體復合物誘導小鼠腹腔巨噬細胞泡沫化.pdf
- TLR4在β2GPI-antiGPi-IgG復合物誘導小鼠腹腔巨噬細胞炎癥因子表達中作用的探討.pdf
- TLR2和TLR4在同種心臟移植免疫中的作用研究.pdf
- MAPKs在anti-β2GPI-β2GPI復合物誘導THP-1細胞表達TF中的作用探討.pdf
- TLR4基因在CD38---小鼠B細胞發(fā)育障礙中的作用.pdf
- IRAKs在anti-β2gpi-β2GPI復合物誘導THP-1細胞表達TF中的作用探討.pdf
- NF-κB和c-Jun-AP-1在抗β2GPI-β2GPI復合物誘導單核細胞表達TF中的作用探討.pdf
- TLR4在抗磷脂綜合征模型小鼠血栓形成中的作用探討.pdf
- NOD受體與TLR4在角膜細胞中的協(xié)同作用.pdf
- MyD88和TRIF依賴途徑均參與TLR4介導anti-β2GPI-β2GPI復合物激活THP-1細胞.pdf
- TLR2、TLR4和TLR9在小鼠抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中的作用.pdf
- Toll樣受體TLR2和TLR4的激活對小鼠骨髓間質(zhì)干細胞免疫調(diào)節(jié)作用的影響.pdf
- TLR4信號調(diào)節(jié)小鼠B淋巴細胞發(fā)育的實驗研究.pdf
- TLR4在AngII所致高血壓小鼠心血管重構(gòu)中的作用.pdf
- TLR4在小鼠腦出血炎癥損傷中的作用及機制初步研究.pdf
評論
0/150
提交評論