基于Tsc1甲基化調(diào)控mTORC1及下游關(guān)鍵因子的電針治療單純性肥胖大鼠機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究以食源性肥胖（diet-induced obesity，DIO）大鼠模型為研究載體，從單純性肥胖（simple obesity）發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)-下丘腦Tsc1-mTOR信號通路入手，在前期本研究組證實(shí)DIO大鼠下丘腦結(jié)節(jié)性硬化癥因子1(Tuberous sclerosis complex1，Tsc1)基因甲基化增加的基礎(chǔ)上，觀察下丘腦DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNA Mthyl-Transferases，Dnmts)對

2、Tsc1基因的甲基化修飾作用，調(diào)控下游哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1(mammalian target of rapamycin complex1，mTORC1)及關(guān)鍵因子在單純性肥胖發(fā)病中的機(jī)制，從表觀遺傳學(xué)的角度觀察針刺治療肥胖的效應(yīng)及機(jī)制。
　　方法：
　　選用剛斷乳的健康清潔級，4周齡（體重70～90g）雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠，剔除體重不符合要求的大鼠，然后隨機(jī)分為造模組和普通飼料組。造模組運(yùn)用

3、改良后的高脂飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)DIO大鼠模型，造模14周后，將造模成功的DIO大鼠隨機(jī)分為肥胖組（即模型組）和針刺組；普通飼料組用普通飼料喂養(yǎng)14周，剔除體重不符合要求的大鼠后作為對照組。針刺治療：選取“天樞、中脘、三陰交和后三里”穴，用自制大鼠固定器固定大鼠后進(jìn)行電針治療，選疏密波，2/15Hz，30min/天，5天/療程，休息2天，共4個(gè)療程，對照組和肥胖組同法固定但不針刺。針刺治療結(jié)束后稱量體重并予以禁食12h，于次日取動(dòng)物標(biāo)本，用免疫

4、組化標(biāo)記法檢測大鼠下丘腦弓狀核Dnmts（Dnmt2、Dnmt3a、Dnmt3b）的表達(dá)情況；用Western Blot蛋白質(zhì)印跡法檢測大鼠下丘腦弓狀核mTORC1基因的蛋白表達(dá)情況；運(yùn)用RT-PCR對大鼠下丘腦弓狀核mTORC1及食欲肽（AgRP、NPY和PoMC）mRNA的含量及Tsc1基因甲基化進(jìn)行檢測，分別比較各組結(jié)果差異。
　　結(jié)果：
　　1、體重結(jié)果：針刺干預(yù)前，肥胖組和針刺組DIO大鼠體重明顯高于對照組（P＜0

5、.01），肥胖組和針刺組組間體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；針刺干預(yù)治療后，肥胖組和針刺組體重、體脂及體脂率均明顯降低（P＜0.01）。
　　2、下丘腦Tsc1甲基化結(jié)果：（1）Tsc1片段1甲基化：與對照組相比較，肥胖組大鼠Tsc1甲基化表達(dá)升高（P＜0.05）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠Tsc1甲基化表達(dá)降低，低于肥胖組（P＜0.05），針刺組大鼠Tsc1甲基化表達(dá)與空白組無差異（P＞0.05）。（2）Tsc1基因片段2甲基

6、化：與對照組相比較，肥胖組大鼠Tsc1基因片段2甲基化表達(dá)升高（P＜0.05）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠Tsc1基因片段2甲基化表達(dá)降低，低于肥胖組，但無明顯差異（P＞0.05），針刺組大鼠Tsc1基因片段2甲基化表達(dá)與空白組無差異（P＞0.05）。（3）Tsc1基因片段3甲基化：與對照組相比較，肥胖組大鼠Tsc1基因片段3甲基化表達(dá)顯著性升高（P＜0.01）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠Tsc1基因片段3甲基化表達(dá)降低，低于肥胖組（P

7、＜0.05），針刺組大鼠Tsc1基因片段3甲基化表達(dá)與空白組無差異（P＞0.05）。
　　3、下丘腦指標(biāo)檢測結(jié)果：（1）Dnmt2：與對照組相比較，肥胖組大鼠下丘腦Dnmt2平均光密度顯著性升高（P＜0.01）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠下丘腦Dnmt2平均光密度明顯降低，低于肥胖組（P＜0.01），針刺組大鼠下丘腦Dnmt2平均光密度與對照組無差異（P＞0.05）。（2）Dnmt3a：與對照組相比較，肥胖組大鼠下丘腦Dnmt3a

8、平均光密度顯著性升高（P＜0.01）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠下丘腦Dnmt3a平均光密度降低，低于肥胖組（P＜0.05），針刺組大鼠下丘腦Dnmt3a平均光密度與對照組無差異（P＞0.05）。（3）Dnmt3b：與對照組相比較，肥胖組大鼠下丘腦Dnmt3b平均光密度顯著性升高（P＜0.01）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠下丘腦Dnmt3b平均光密度明顯降低，低于肥胖組（P＜0.01），針刺組大鼠下丘腦Dnmt3b平均光密度與對照組無差

9、異（P＞0.05）。（4）mTORC1mRNA和蛋白：與對照組相比較，肥胖組大鼠下丘腦mTORC1基因mRNA、蛋白顯著性升高（P＜0.01）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠下丘腦mTORC1基因mRNA、蛋白明顯降低，低于肥胖組（P=0.01，P＜0.05），針刺組大鼠下丘腦mTORC1基因mRNA、蛋白高于對照組（P＜0.05，P＜0.01）。（5）AgRP mRNA：與對照組相比較，肥胖組大鼠下丘腦AgRP基因mRNA顯著性升高（P＜

10、0.01）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠下丘腦AgRP基因mRNA明顯降低，低于肥胖組（P＜0.01），針刺組大鼠下丘腦AgRP基因mRNA高于對照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。（6）NPY mRNA：與對照組相比較，肥胖組大鼠下丘腦NPY基因mRNA顯著性升高（P＜0.01）；電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠下丘腦NPY基因mRNA明顯降低，低于肥胖組（P＜0.01），針刺組大鼠下丘腦NPY基因mRNA高于對照組（P＜0.01）。（7）

11、PoMC mRNA：與對照組相比較，肥胖組大鼠下丘腦PoMC基因mRNA顯著性降低（P＜0.01）；針刺組大鼠下丘腦PoMC基因mRNA明顯降低，高于肥胖組（P＜0.05），電針干預(yù)治療后，針刺組大鼠下丘腦PoMC基因mRNA低于對照組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、針刺“中脘”、“天樞”、“三陰交”、“后三里”能有效減輕DIO大鼠體重，降低體脂含量及體脂率；
　　2、DIO大鼠下丘腦DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（Dnm