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文檔簡介
1、菊花(Chrysanthemum morifolium)原產(chǎn)我國,為菊科菊屬栽培種,具有很高的觀賞和經(jīng)濟(jì)價值,是我國十大傳統(tǒng)名花和世界四大切花之一。我國是菊花的起源中心和菊屬種質(zhì)資源的分布中心,雖然其種質(zhì)資源豐富,栽培品種繁多,花色、花型豐富,但菊花缺少藍(lán)色、藍(lán)紫色花色。因此,利用基因工程技術(shù)進(jìn)行菊花藍(lán)色花色新品種培育,對豐富菊花花色具有重要意義,而篩選合適的藍(lán)色基因轉(zhuǎn)化受體及其高頻再生體系的建立是進(jìn)行藍(lán)色菊花轉(zhuǎn)基因育種的前提條件。為此
2、,本研究選取了南京農(nóng)業(yè)大學(xué)“中國菊花種質(zhì)資源保存中心”提供的27個切花菊品種為試驗材料,對其花瓣進(jìn)行飛燕草素前體二氫楊梅素的飼喂培養(yǎng),并測定飼喂后花瓣飛燕草含量;從中選取飛燕草素含量較高的品種‘南農(nóng)粉翠’和‘南農(nóng)粉靨’為試驗材料,建立其高頻再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系。主要研究結(jié)果如下:
1.在高效液相HPLC條件的基礎(chǔ)上,摸索了檢測飛燕草素苷的洗脫條件,建立確定了植物花青苷快速檢測方法。試驗表明菊花的花青苷可采用0.1 mol.L
3、-1鹽酸甲醇提取,再加等體積10%甲酸水,用0.22um濾膜過濾后即可進(jìn)行UPLC的測定,通過洗脫條件的優(yōu)化可在9min內(nèi)實現(xiàn)飛燕草素與其他花青苷的分離,當(dāng)飛燕草素在2.5~40mg.L-1范圍內(nèi)時具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.999。
2.以27個切花菊品種為材料,采用2mg.ml-1濃度的飛燕草素前體二氫楊梅素溶液對菊花花瓣進(jìn)行離體培養(yǎng),測定培養(yǎng)后花瓣中的飛燕草素。結(jié)果表明,粉色系花瓣均具有催化二氫楊梅素合成飛燕草素的
4、能力,其中,二氫楊梅素添加培養(yǎng)的‘南農(nóng)粉翠,和‘南農(nóng)粉靨’花瓣中的飛燕草素含量均在10mg.L-1以上,可作為藍(lán)色花色轉(zhuǎn)基因候選品種。
3.從‘南農(nóng)粉翠’和‘南農(nóng)粉靨’為材料,利用不同分化培養(yǎng)基,研究了不同激素濃度配比對菊花不定芽發(fā)生的影響。優(yōu)化了菊花的再生條件,獲得了菊花葉片的高效再生體系。結(jié)果表明葉片最適分化培養(yǎng)基分別為:‘南農(nóng)粉翠’MS+6-BA1.0 mg.L-1+NAA0.5mg.L-1,再生率為80.65%;‘南農(nóng)
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