新型底涂-沖洗劑提高自酸蝕粘接劑的牙本質(zhì)粘接持久性的研究.pdf

1、本文從以下幾部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 新型底涂-沖洗劑對(duì)自酸蝕粘接劑的短期和長(zhǎng)期牙本質(zhì)粘接強(qiáng)度的影響
　　目的:研究含有酸性功能單體MDP和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)抑制劑(苯扎氯銨(BAC)、聚乙烯磷酸(PVPA)、原花青素(pA))的新型底涂-沖洗劑處理牙本質(zhì)后，對(duì)自酸蝕粘接劑的短期和長(zhǎng)期牙本質(zhì)粘接強(qiáng)度和樹(shù)脂-牙本質(zhì)界面微觀形態(tài)的影響。
　　方法:用MDP和MMPs抑制劑配制8種底涂-沖洗劑(5％MDP,5％M

2、DP-BAC,5％MDP-PVPA,5％MDP-PA,15％MDP,15％MDP-BAC,15％MDP-PVPA，15％MDP-PA(wt);其中BAC，PVPA和PA分別為1％wt，1000μ g/ml和15％PA)。將54顆離體牙隨機(jī)分為9組，每組6顆牙齒。用IsometTM低速切割機(jī)將離體牙垂直于牙冠長(zhǎng)軸冠牙合中1/3處切開(kāi)，暴露牙本質(zhì)表面后用320#SiC打磨制備統(tǒng)一的玷污層。將實(shí)驗(yàn)組底涂-沖洗劑(5％ MDP,5％ MDP-B

3、AC，5％MDP-PVPA,5％ MDP-PA;15％ MDP,15％ MDP-BAC,15％ MDP-PVPA,15％MDP-PA)涂布于牙本質(zhì)表面30s，水沖洗30s，氣槍輕吹，而對(duì)照組不用底涂-沖洗劑處理。再用自酸蝕粘接劑Clearfil S3 Bond（可樂(lè)麗公司，日本）涂于牙本質(zhì)表面20s，強(qiáng)吹5s，光固化（Radii plus，澳大利亞南方牙科工業(yè)有限公司）10s，用復(fù)合樹(shù)脂Clearfil Majesty（可樂(lè)麗公司，日本

4、）分4層充填，每層厚度1mm，每次光固化40 s。將樣本置于37℃水儲(chǔ)存24小時(shí)后，用低速切割儀把樣本制成約1*1*8mm牙本質(zhì)樹(shù)脂條。來(lái)自同一顆牙齒的牙本質(zhì)樹(shù)脂條再隨機(jī)分為即刻組(24h)和長(zhǎng)期組(1y)，水儲(chǔ)存24h和1午后分別進(jìn)行微拉伸強(qiáng)度(MTBS)測(cè)試實(shí)驗(yàn)。體視顯微鏡下觀察所有斷裂樣本進(jìn)行斷裂模式分析。每組8個(gè)樣本條用于掃描電鏡觀察樹(shù)脂-牙本質(zhì)界面的微觀形態(tài)。將36顆離體牙隨機(jī)分為9組，用低速切片機(jī)將牙冠切開(kāi)，暴露冠中1/3牙

5、本質(zhì)，切取厚度0.7mm的牙本質(zhì)片（每組2顆牙，6個(gè)牙本質(zhì)片），樣本制備同前，然后將樣本制備超薄切片并透射電鏡(TEM)觀察。數(shù)據(jù)用SPSS22.0軟件處理，用析因設(shè)計(jì)方差分析和LSD多重比較進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:除5％MDP-BAC組外，低濃度MDP組(5％MDP，5％MDP-PVPA，5％MDP-PA)均未能增加短期牙本質(zhì)MTBS(P＞0.05)。高濃度MDP組(15％MDP,15％MDP-BAC,15％MDP-PVPA

6、和15％MDP-PA)和5％MDP-BAC組的短期牙本質(zhì)MTBS與對(duì)照組相比有顯著性的提高(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組的長(zhǎng)期牙本質(zhì)MTBS均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。其中15％MDP-BAC組的長(zhǎng)期MTBS與15％MDP-PVPA組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但前者顯著高于其他組(P＜0.05)。對(duì)照組經(jīng)過(guò)1年水儲(chǔ)存后MTBS顯著降低(P＜0.05)。而實(shí)驗(yàn)組MTBS未見(jiàn)明顯改變(P＞0.05)。SEM長(zhǎng)期樣本觀察到對(duì)照組樹(shù)脂-牙

7、本質(zhì)界面出現(xiàn)裂隙，而實(shí)驗(yàn)組復(fù)合樹(shù)脂與牙本質(zhì)結(jié)合緊密。底涂-沖洗牙本質(zhì)表面后，牙本質(zhì)表面玷污層大部分被去除。TEM長(zhǎng)期樣本觀察到對(duì)照組玷污層內(nèi)部出現(xiàn)微裂隙，實(shí)驗(yàn)組牙本質(zhì)混合層與短期相比無(wú)明顯改變，可見(jiàn)粘接劑層、少無(wú)結(jié)構(gòu)層和混合層。在混合層中可見(jiàn)大量針狀羥基磷灰石晶體。
　　結(jié)論:應(yīng)用新型底涂-沖洗劑5％MDP-BAC、15％MDP、15％MDP-BAC、15％MDP-PVPA或15％MDP-PA可以顯著增強(qiáng)自酸蝕粘接劑的牙本質(zhì)短期和

8、長(zhǎng)期粘接強(qiáng)度，且使長(zhǎng)期牙本質(zhì)粘接強(qiáng)度至少一年不降低。底涂-沖洗方法（prime-&-rinse approach）是現(xiàn)在自酸蝕類(lèi)粘接劑使用方法的一種全新補(bǔ)充。
　　第二部分 新型底涂-沖洗劑對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制作用
　　目的:研究新型底涂-沖洗劑是否具有抑制MMPs的作用以及抑制強(qiáng)度。
　　方法:實(shí)驗(yàn)前，用10μg/ml胰蛋白酶與rhMMP-8或-9混合培養(yǎng)2小時(shí)以激活rhMMP-8和-9（Biolegend，圣地亞

9、哥，美國(guó)），每組重復(fù)4次，用96孔板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)混合溶液(100μl)孔中加入:2μl rhMMP-8或-9(19.6 ng/孔)，10μl底涂-沖洗劑(5％ MDP，5％ MDP-BAC，5％ MDP-PVPA，5％ MDP-PA，15％ MDP，15％ MDP-BAC，15％ MDP-PVPA或15％ MDP-PA)，50μl含硫多肽基質(zhì)溶液（Sensolyte通用型MMP比色試劑盒提供，AnaSpec，菲蒙，美國(guó)）和38μl

10、緩沖液。對(duì)照組包括:實(shí)驗(yàn)混合液對(duì)照組加一種10μl底涂-沖洗劑;陽(yáng)性對(duì)照組加2μl rhMMP-8或-9;抑制劑對(duì)照組加2μl rhMMP-8或-9和10μl濃度為20μM的一種MMPs抑制劑GM6001（又稱(chēng)為加拉定，由Sensolyte比色試劑盒提供）;基質(zhì)對(duì)照組加50μl緩沖液。每個(gè)對(duì)照組加入適量緩沖液使體積達(dá)到50μl后，再加入50μl含硫多肽基質(zhì)溶液使每個(gè)對(duì)照組總體積也達(dá)到100μl。每孔溶液混合后用酶標(biāo)儀每隔10 min在4

11、12nm處讀數(shù)，共6次，得出吸光度均數(shù)后再計(jì)算，公式為:基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制率=1-（實(shí)驗(yàn)混合溶液的吸光度一實(shí)驗(yàn)混合液對(duì)照組的吸光度）/（陽(yáng)性對(duì)照組的吸光度一基質(zhì)對(duì)照組的吸光度）。計(jì)算出的抑制率用單因素方差分析和Tukey多重比較，顯著水平為0.05。
　　結(jié)果:5％MDP底涂-沖洗劑對(duì)rhMMP-8，9的抑制率均顯著低于其他7個(gè)底涂-沖洗劑組和對(duì)照組GM6001對(duì)rhMMP-8，9的抑制率(P＜0.05)。其余7組底涂-沖洗劑對(duì)

12、rhMMP-9的抑制率與對(duì)照組GM6001對(duì)rhMMP-9的抑制率相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)。15％MDP-PVPA和15％MDP-PA底涂劑組對(duì)rhMMP-8的抑制率顯著高于GM6001對(duì)rhMMP-8的抑制率(P＜0.05)。
　　結(jié)論:新型添加MMPs抑制劑的底涂-沖洗劑均具有顯著抑制MMPs的作用。
　　第三部分 新型底涂-沖洗劑對(duì)自酸蝕粘接劑的牙本質(zhì)粘接耐酶解性能的影響
　　目的:研究新型底涂-沖洗劑(1

13、5％ MDP,15％ MDP-BAC，15％ MDP-PVPA)對(duì)自酸蝕類(lèi)粘接劑酶解前后的牙本質(zhì)粘接強(qiáng)度和樹(shù)脂-牙本質(zhì)界面微觀形態(tài)的影響。
　　方法:將108顆離體牙隨機(jī)分為12組:3種粘接劑(AdperTM Easy One，3MESPE，美國(guó);i Bond，Heraeus Kulzer GmbH，德國(guó);G-Bond，GC，日本)，每種粘接劑36顆牙齒;每種粘接劑根據(jù)底涂劑不同分為1個(gè)對(duì)照組，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組(15％MDP,15％ M

14、DP-BAC，15％ MDP-PVPA)，每個(gè)亞組9顆牙齒。用低速切割機(jī)暴露離體牙冠牙合中1/3的牙本質(zhì)表面，然后用320#SiC打磨制備統(tǒng)一的玷污層。實(shí)驗(yàn)組將底涂劑分別涂布于牙本質(zhì)表面30s，水沖洗10s，輕吹，而對(duì)照組不用底涂-沖洗劑處理牙本質(zhì)表面，再按使用說(shuō)明分別涂布自酸蝕粘接劑(AdperTM EasyOne，i Bond，G-Bond)，光固化，再分別用同一廠家復(fù)合樹(shù)脂(FiltekTMZ250，Solitaire2，GC G

15、radia Direct)分層充填，每層厚度1mm，共4層，每次光固化40s。將所有樣本置于37℃自來(lái)水中24小時(shí)后，用低速切割儀把樣本切割成約1*1*8mm牙本質(zhì)樹(shù)脂條，來(lái)自同一顆牙齒的牙本質(zhì)樹(shù)脂條再隨機(jī)分為三組:即刻組、Ⅰ型和Ⅱ型膠原酶處理組后，即刻組樣本進(jìn)行微拉伸強(qiáng)度測(cè)試，Ⅰ型、Ⅱ型膠原酶組的樣本分別在2mg/mlⅠ型和Ⅱ型膠原酶（Sigma-Aldrich，美國(guó)）溶液儲(chǔ)存24小時(shí)后進(jìn)行MTBS測(cè)試，并計(jì)算微拉伸強(qiáng)度。將72顆離體

16、牙隨機(jī)分為12組（每種粘接劑24顆牙齒，每個(gè)亞組6顆牙齒），用IsometTM低速切割機(jī)垂直于牙冠長(zhǎng)軸切開(kāi)，暴露冠中1/3牙本質(zhì)，切取厚度為0.7mm的牙本質(zhì)片，樣本制備同前，再用透射電鏡觀察樹(shù)脂-牙本質(zhì)界面的微觀形貌。用SPSS22.0軟件處理，析因設(shè)計(jì)方差分析和LSD多重比較進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:三種自酸蝕類(lèi)粘接劑的即刻微拉伸強(qiáng)度按從大到小順序排列如下:AdperTM Easy One＞i Bond＞G-Bond(P＜0

17、.01)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組(MDP，MDP-BAC，MDP-PVPA)的即刻MTBS均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，而在同一種粘接劑中的三個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間并沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。三種自酸蝕類(lèi)粘接劑的對(duì)照組在經(jīng)過(guò)Ⅰ型膠原酶和Ⅱ型膠原酶酶解后，MTBS均顯著降低(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組酶解后MTBS仍顯著高于對(duì)照組(P＜0.005)。三種底涂劑的耐酶解能力按從大到小順序排列如下:MDP-BAC＞MDP-PVPA＞MDP。TEM觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組