去骨瓣減壓術(shù)對CD1小鼠創(chuàng)傷性腦損傷后行為學改變及繼發(fā)性損傷的影響.pdf

1、目的:
　　創(chuàng)傷性腦損傷(Trauma Brain Injury, TBI)屬于神經(jīng)外科常見病，以高致殘率、高死亡率為特征，耗費了極高的社會成本。根據(jù)物理損傷的性質(zhì)、組織病理類型、意識及神經(jīng)功能的損傷程度，可以將創(chuàng)傷性腦損傷進行諸多分類。雖然專家們已經(jīng)制定了治療指南用以改善預后，但想要在發(fā)病早期進一步提高治療效果，仍需要進行大量的工作。去骨瓣減壓術(shù)(Decompressive Craniotomy，DC)指去除部分顱骨，剪開硬腦膜

2、，以緩解顱內(nèi)高壓，降低腦水腫造成的損害。一旦顱內(nèi)壓恢復至正常水平，患者病情相對平穩(wěn)（通常是去除骨瓣1月～3月后），行顱骨修補術(shù)。嚴重腦血管病引起的腦腫脹行去骨瓣減壓術(shù)的治療效果已經(jīng)有完善的研究得以證實，但去骨瓣減壓術(shù)對于創(chuàng)傷性腦損傷的影響仍存在爭議。本研究應用自由落體打擊模型建立CD1小鼠TBI模型，應用干濕重法檢測腦水腫的程度，采用神經(jīng)行為學人工評分及一系列神經(jīng)行為學試驗觀察TBI及DC后的行為學變化，并試圖闡明其分子機制，為臨床上治

3、療創(chuàng)傷性腦損傷及顱骨修補最佳時機提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　采用清潔級CD1小鼠75只，成年雄性，體重40g±5g，隨機分為正常對照組，TBI組，TBI+DC組;采用自由落體打擊模型致小鼠創(chuàng)傷性腦損傷(TBI);正常對照組15只，不作任何干預，正常飼養(yǎng);TBI組30只，給予自由落體打擊造模:小鼠頭部皮膚剪開，暴露左側(cè)頂骨，將頭部固定于金屬硬質(zhì)板上，左側(cè)項骨置與金屬板平行，圓柱形重物重10g，高度25cm，自直徑稍大于自身

4、的有機玻璃管中自由落下打擊已暴露的顱骨部分，避免回彈傷，操作完成后規(guī)范縫合頭皮。TBI+DC組30只，先給予自由落體打擊造模，過程同上，4～6小時后行去骨瓣減壓術(shù)，顯微鏡下用微型電鉆磨除打擊部位的顱骨;每組各取固定5只于處理完成后1小時、24小時、7天、14天、21天、28天行神經(jīng)行為學評分(Neurological SeverityScores，NSS);除正常對照組外，各組干預前3天及干預后7天、14天、21天、28天行曠場實驗;1

5、4天、28天時行高架十字迷宮實驗;28天時行巴恩斯迷宮實驗。除正常對照組外，其余每組每個時間點另取3只，分別于處理完成后12小時、1天、3天、5天、7天用干濕重法測定腦組織水分含量，放入65℃烤箱48小時后稱干重。用免疫組織化學方法觀察膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein，GFAP)和神經(jīng)元特異性核蛋白(neuron-specific nuclear protein，Neun)在各組小鼠大腦皮

6、層中的表達情況，每組每個時間點取5只，于處理完成后7天、14天、28天處死灌注取腦，進行免疫組化試驗。用病理圖文分析系統(tǒng)圖像處理軟件Image-Proplus6.0分析圖像，所得數(shù)據(jù)用SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果:
　　1一般情況:實驗組(TBI組及TBI+DC組)麻醉清醒后食欲下降，活動減少，嗜睡，約1周后有所恢復，但較正常對照組差。正常對照組進食水及精神狀況良好，活動正常。
　　2行為學實驗

7、>　　2.1神經(jīng)行為學評分:NSS隨時間的變化趨勢三組不同，每個時間點上兩兩分組比較，TBI組與TBI+DC組無明顯差異，但NSS均高于正常對照組。均數(shù)比較1h、24h、7d、14d、21d時TBI組＞TBI+DC組，28d時TBI組＜TBI+DC組。
　　2.2曠場實驗
　　2.2.1總體平均速度:兩組間總體平均速度總體而言無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），TBI組實驗處理后總體平均速度明顯下降，14天后有緩慢上升;TBI+D

8、C組實驗處理后亦有下降，維持一段平臺期后，再次出現(xiàn)下降期。均數(shù)比較7d、14d、21d時TBI組＜TBI+DC組，28d時TBI組＞TBI+DC組。
　　2.2.2中央?yún)^(qū)活動時間:兩組間中央?yún)^(qū)活動時間總體而言無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），TBI組實驗處理后中央?yún)^(qū)活動時間明顯減少，21天后有小幅度增多;TBI+DC組實驗處理后持續(xù)減少，前期均值高于TBI組，21天左右相交，后低于TBI組。
　　2.2.3四角活動時間:兩組間四

9、角活動時間總體而言無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，TBI組實驗處理后四角活動時間明顯增多，14天后有所下降; TBI+DC組實驗處理后持續(xù)上升，總體低于TBI組，14天后變化不大。均數(shù)比較7d、14d、21d時TBI組＞TBI+DC組，28d時TBI組＜TBI+DC組。
　　2.3高架十字迷宮
　　2.3.1(1)14天時進臂總次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），兩兩比較TBI組與TBI+DC組無統(tǒng)計學差異(P＞0

10、.05)，進臂總次數(shù)均較正常對照組明顯增多。(2)14天時開臂進入次數(shù):三組比較結(jié)果無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。(3)14天時閉臂進入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，兩兩比較互不相同，進入閉臂次數(shù)TBI組＞TBI+DC組＞CONTROL組。
　　2.3.2(1)28天時進臂總次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學差異(P＜0.05），兩兩比較TBI組與TBI+DC組無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），進臂總次數(shù)仍均高于正常對照組。

11、(2)28天時開臂進入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學差異（P＞0.05），兩兩比較TBI組與正常對照組無統(tǒng)計學差異(P＞0.05），進入開臂次數(shù)均高于TBI+DC組。(3)28天時閉臂進入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學差異(P＜0.05），兩兩比較互不相同，進入閉臂次數(shù)TBI+DC組＞TBI組＞CONTROL組。
　　2.4巴恩斯迷宮錯誤次數(shù)及找到目標所需時間:三組比較結(jié)果有統(tǒng)計學差異(P＜0.05），兩兩比較互不相同，錯誤次數(shù)TBI+D

12、C組＞TBI組＞CONTROL組。
　　3干濕法:各組腦組織水分含量總體而言不同(P＜0.05），實驗處理完成后
　　3天左右腦組織水分含量達最高峰，左側(cè)即創(chuàng)傷側(cè)腦組織TBI+DC組低于TBI組，右側(cè)二者差別不大。
　　4免疫組織化學(Immunohistochemistry，IHC)
　　4.1神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP):各組GFAP陽性細胞數(shù)總體而言不同(P＜0.05)，TBI組GFAP陽性細胞數(shù)7d＞

13、14d＞28d，TBI+DC組14d左右處于低峰，對照組隨時間變化不大。
　　4.2神經(jīng)元特異性核蛋白(Neun):各組Neun陽性細胞數(shù)總體而言不同(P＜0.05），TBI組及TBI+DC組Neun陽性細胞數(shù)均隨時間逐漸降低，7d時TBI+DC組＞TBI組，14d時二者范圍有重疊，28d時TBI組＞TBI+DC組;對照組隨時間變化不大。
　　結(jié)論:
　　1通過自由落體打擊模型可以成功建立TBI動物模型來模擬TBI的病

14、理及行為學改變。
　　2 TBI明顯損害CD1小鼠的認知能力及運動功能，DC在21d前能減輕上述損害，但28d時又出現(xiàn)損害加重。
　　3 TBI使CD1小鼠的焦慮水平明顯上升，14d時DC對焦慮起緩解作用，28d時又加劇焦慮。
　　428d時TBI及DC均損害CD1小鼠的空間記憶力。
　　5 TBI引起CD1小鼠明顯腦水腫，3d左右達高峰，DC可減輕腦水腫。
　　6 TBI引起CD1小鼠明顯大腦皮層炎癥反應