基于光鑷拉曼光譜技術的葡萄球菌黃素生物合成的研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌在臨床上是極為重要的病原菌，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)造成的感染成為與乙型肝炎，艾滋病并列的世界三大感染頑疾。典型的金黃色葡萄球菌在顯微鏡下呈球型，葡萄串狀排列，因此被稱為葡萄球菌。同時，由于它能產生一種金黃色的類胡蘿卜素而獲得了金黃色葡萄球菌的名稱。這種金黃色的類胡蘿卜素的色素（Staphyloxanthin）增強了細菌對氧化脅迫和對宿主嗜中性粒細胞吞噬的抵抗能力，可以幫助細菌逃避宿主的免疫系統(tǒng)，與細菌的毒力有

2、著密切的聯(lián)系，因此阻斷葡萄球菌黃素生物合成有望成為一種新的治療MRSA感染的有效手段。
　　高效準確測定金葡菌內葡萄球菌黃素是理解其致毒機理、生物合成及新型抗生素篩選的前提條件，傳統(tǒng)的基于溶劑提取的定量方法操作較為繁瑣且使用有毒的甲醇。光鑷拉曼光譜技術(Laser tweezers Raman spectroscopy，LTRS)將光鑷技術和拉曼光譜技術結合起來，利用高度匯聚的激光束，囚禁溶液中的活細胞，再通過瞬時加大囚禁細胞的光

3、束激發(fā)細胞內分子的拉曼散射。該技術充分結合了共焦顯微、光鑷、拉曼光譜的優(yōu)點，提高了檢測的靈敏度、準確度，是研究生理狀態(tài)下單個活細胞內化學物質含量及結構變化的有力工具。
　　為此，本文以利用光鑷拉曼光譜原位測定金葡菌活細胞內葡萄球菌黃素的方法，并以此手段深入研究環(huán)境因素及生長條件對葡萄球菌黃素生物合成的影響，了解菌體色素含量與金葡菌抵抗氧化脅迫能力的關系。本論文主要研究內容包括以下幾點:
　　1.利用LTRS研究不同環(huán)境因素和

4、生長條件對金葡菌內葡萄球菌黃素生物合成的影響，如外界溫度、pH值、不同葡萄糖濃度、不同氮源等的影響;研究一個生長周期內(接種0-24h)內金葡菌細胞內積累的葡萄球菌黃素含量的漲落規(guī)律。
　　2.探索LTRS技術用于篩選和評價葡萄球菌黃素合成抑制藥物的可行性，選擇目前已經為文獻證實有葡萄球菌黃素合成抑制活性的藥物，研究不同黃酮濃度與金葡菌內葡萄球菌黃素累積濃度間是否存在負相關關系，即量效關系。
　　3.利用LTRS研究葡萄球菌