bFGF和BMP-2預(yù)處理對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞干性維持與成骨分化潛能的差異影響.pdf

1、目的：
　　牙周再生一直是牙周領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone morrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)是骨髓來(lái)源的多能干細(xì)胞，在組織工程領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor,bFGF)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)在骨再生及牙周組織再生領(lǐng)域的應(yīng)用已得到廣泛研究。然而BMMSCs

2、會(huì)隨著增殖傳代逐漸失去干細(xì)胞特性。因此如何獲得具有良好增殖能力和成骨分化潛能的干細(xì)胞是目前牙周組織工程領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。本研究旨在探究通過(guò)bFGF和BMP-2分別預(yù)處理細(xì)胞的方法對(duì)BMMSCs增殖、成骨分化、干性維持方面的差異影響并探討其機(jī)制。
　　方法：
　　1、分離培養(yǎng)Wistar大鼠的BMMSCs，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMMSCs表面CD34,CD44,CD45,CD90的表達(dá)情況。將培養(yǎng)至P3代的BMMSCs分為三組，分別用

3、普通培養(yǎng)基、含20ng/ml bFGF的培養(yǎng)基和含100ng/ml BMP-2培養(yǎng)基培養(yǎng)3天，收集細(xì)胞（以下簡(jiǎn)稱為對(duì)照組、bFGF預(yù)處理組及BMP-2預(yù)處理組）。然后在無(wú)bFGF或BMP-2作用的條件下繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。
　　2、三組BMMSCs預(yù)處理后培養(yǎng)1,2,3,5天，采用CCK-8法檢測(cè)三組BMMSCs的增殖活性。并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布的變化。
　　3、三組BMMSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3,7,14天后采用ALP活

4、性試劑盒檢測(cè)細(xì)胞的ALP活性。成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)28天后，進(jìn)行茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié)，同時(shí)進(jìn)行定量檢測(cè)。
　　4、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)三組BMMSCs表面CD90的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示BMMSCs表面CD90、CD44高表達(dá)，造血系干細(xì)胞表面標(biāo)志抗原CD34、CD45低表達(dá)。
　　2、CCK8細(xì)胞增殖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:bFGF和BMP-2預(yù)處理組細(xì)胞增殖活性顯著高于對(duì)照組(p＜0.05)，并

5、且bFGF預(yù)處理組BMMSCs的增殖活性較BMP-2預(yù)處理組增強(qiáng)(p＜0.05)。細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示:經(jīng)bFGF預(yù)處理后處于分裂期（S期）的細(xì)胞數(shù)增多，而處于靜止期（G0/G1期）的細(xì)胞數(shù)減少(p＜0.05)，而BMP-2預(yù)處理后BMMSCs的細(xì)胞周期分布（G0/G1期，S期，G2/M期）沒(méi)有顯著改變。
　　3、ALP活性檢測(cè)結(jié)果顯示:第3天時(shí)，BMP-2預(yù)處理組BMMSCs ALP活性高于對(duì)照組和bFGF預(yù)處理組(p＜0.05

6、)，第7天時(shí)，bFGF預(yù)處理組與BMP-2預(yù)處理組BMMSCs ALP活性達(dá)到最高峰且兩組ALP活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，并顯著高于對(duì)照組(p＜0.05)，而第14天時(shí)，bFGF預(yù)處理組細(xì)胞ALP活性顯著高于對(duì)照組和BMP-2預(yù)處理組(p＜0.05)。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)28天后，鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色及定量檢測(cè)結(jié)果顯示:三組細(xì)胞的鈣結(jié)節(jié)形成情況沒(méi)有明顯差異(p＞0.05)。
　　4、bFGF預(yù)處理組CD90陽(yáng)性細(xì)胞百分比高于對(duì)照組