復(fù)方丹參滴丸對(duì)小鼠miRNA表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、復(fù)方丹參滴丸是由丹參、三七、冰片三味中藥組成的復(fù)方藥，該復(fù)方藥主要適應(yīng)癥為冠心病、心絞痛，此外，對(duì)高血壓、高脂血癥、腦血栓、糖尿病等多種疾病也有很好的療效。藥理學(xué)研究表明，復(fù)方丹參滴丸中酚酸類成分具有提高機(jī)體抗凝和纖溶活性、抑制血小板聚集、抗血栓形成、抗氧化及保護(hù)心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞、改善微循環(huán)障礙等作用；皂苷類成分具有改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、抗血栓形成、擴(kuò)張血管及保護(hù)心肌等作用。
　　為了解復(fù)方丹參滴丸對(duì)心血

2、管疾病防治的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)從研究復(fù)方丹參滴丸對(duì)小鼠體內(nèi)microRNA（miRNA）表達(dá)的影響，通過深入研究差異表達(dá)miRNA在心臟病防治中可能的作用，期望從一個(gè)全新的視角揭示復(fù)方丹參滴丸對(duì)心血管疾病防治的分子作用機(jī)制。
　　為了尋找復(fù)方丹參滴丸引起的小鼠體內(nèi)差異表達(dá)的內(nèi)源性miRNA，實(shí)驗(yàn)中將喂食500ul4.4mg/ml復(fù)方丹參滴丸溶液的Institute for Cancer Research（ICR）小鼠作為實(shí)驗(yàn)組，將喂

3、食等量水的ICR小鼠作為對(duì)照組，在0h、0.5h、1h、3h、6h和12h分別取小鼠眼眶靜脈血及心、肝、腎、肺和胃等器官，將小鼠眼眶靜脈血送公司測序sRNA庫，分析測序結(jié)果后發(fā)現(xiàn)有42條miRNA表達(dá)發(fā)生明顯差異，其中16條表達(dá)上調(diào)，26條表達(dá)下調(diào)。經(jīng)過quantitative reverse-transcription PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn)16條上調(diào)的miRNAs中有12個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，1個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)，剩余

4、的3個(gè) miRNA表達(dá)沒有明顯變化；而26條下調(diào)的miRNA中，有20個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)，1個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，剩余的5個(gè)miRNA表達(dá)沒有明顯變化。這42條 miRNA均表現(xiàn)出明顯的組織特異性。在小鼠心臟中，血液中表達(dá)上調(diào)的16條miRNA中有11條miRNA表達(dá)上調(diào)，5條miRNA表達(dá)沒有明顯變化；血液中表達(dá)下調(diào)的26條miRNA中有21條表現(xiàn)為上調(diào)，其余5條miRNA表達(dá)沒有明顯改變。
　　為了驗(yàn)證測序結(jié)果中差異表達(dá)的m

5、iRNA在心肌細(xì)胞凋亡和心肌細(xì)胞肥大過程中的作用，本實(shí)驗(yàn)利用不同心肌肥大誘導(dǎo)劑鹽酸苯丙氨酸（PE，10μ M）、血管緊張素（AngⅡ,10μ g/L）和類胰島素生長因子1（IGF-1,100nM）誘導(dǎo)原代心肌細(xì)胞肥大，并檢測肥大誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞中42條 miRNA表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在42條差異表達(dá)的miRNA中，有19條miRNA在PE處理時(shí)表達(dá)明顯下調(diào)， 有6條miRNA在AngⅡ處理時(shí)表達(dá)變化最明顯，其余5條miRNA在IG

6、F-1處理時(shí)表達(dá)變化最明顯，而miR7084-5p在經(jīng)過PE和AngⅡ處理后的心肌細(xì)胞中均表達(dá)上調(diào)，IGF-1后表達(dá)下調(diào)
　　為了探索差異表達(dá)的miRNA在心肌細(xì)胞肥大及細(xì)胞凋亡中的作用，實(shí)驗(yàn)中選擇5條 miRNA—miR-106a-5p、miR-1964-3p、miR-467d-3p、miR-468-3p和miR-672-5p進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR106a-3p、miR467d-3p和miR486-3p表達(dá)受到抑制后心肌細(xì)胞直