五味子提取物對CES2、CYP450s的抑制作用及其對緩解伊立替康所致腹瀉的影響.pdf

1、背景：伊立替康（Irinotecan，CPT-11）是一種水溶性的喜樹堿半合成衍生物，在體內(nèi)可由羧酸酯酶2（Carboxylesterases，CES2）轉(zhuǎn)化為7-乙基-10-羥基喜樹堿（SN-38），SN-38能阻斷DNA復(fù)制，起到抗腫瘤作用。同時，SN-38也能在腸道中不斷蓄積破壞腸黏膜，導(dǎo)致遲發(fā)性腹瀉。故抑制CES2的活性可作為減輕CPT-11所致腹瀉的有效途徑之一。
　　中藥五味子屬多年生落葉藤本植物，具有多種功效，其中收

2、斂固澀是其最主要的功用之一，臨床上常用來治療慢性腹瀉，療效顯著。故本文用中藥五味子提取物體外作用于CES2來研究五味子對CES2的抑制能力，從而為緩解伊立替康腸道毒性提供一種有效的方法。
　　另外，五味子主要活性成分五味子酚在體內(nèi)主要由細(xì)胞色素P450酶(CYP450s)催化代謝，屬于CYP450s系中的CYP3A4是主要代謝酶。并且，CYP3A4的特異性抑制劑酮康唑完全抑制了五味子酚代謝產(chǎn)物的生成。因此，為明確五味子酚對人肝微粒

3、體CYP450酶活性的影響，本研究還以人肝微粒體CYP450s的特異性抑制劑為底物、五味子酚作為抑制劑進(jìn)行了體外Ⅰ相代謝實(shí)驗(yàn)。
　　目的：本研究旨在考查五味子提取物對羧酸酯酶2和細(xì)胞色素P450酶(CYP450s)的抑制能力，找到一種緩解伊立替康所致腹瀉的潛在方法及預(yù)測五味子酚對體內(nèi)I相代謝反應(yīng)的影響。
　　方法：
　　1.五味子4種木脂素類化合物對CES2的抑制劑篩選及其對緩解伊立替康所致腹瀉的作用：以五味子4種木脂

4、素類化合物作為抑制劑，熒光素二乙酸酯（FD）作為CES2的探針底物，將抑制劑和FD加入人肝微粒體反應(yīng)體系中，在37℃條件下共同孵育（對照組不加抑制劑，以二甲基亞砜代替），反應(yīng)終止后離心去除蛋白，取上清液在熒光酶標(biāo)儀中測定代謝產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度，通過分析代謝產(chǎn)物的抑制率，判斷五味子4種主要活性成分對CES2的抑制程度。
　　2.五味子酚對CYP450s的抑制作用：以五味子酚作為抑制劑，CYP450酶的特異性抑制劑為底物，設(shè)置一個空白對照

5、組，對照組不加抑制劑，用甲醇代替。將底物、抑制劑、磷酸鉀緩沖液、人肝微粒體分別加入NADPH體系，在37℃條件下孵育相應(yīng)時間后終止反應(yīng)，然后離心去除蛋白，取上清液在高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀LCMS-2010EV中測定代謝產(chǎn)物的峰面積，通過分析產(chǎn)物峰面積的減少率，判斷五味子酚對CYP450s的抑制程度。
　　結(jié)果：1.五味子酚對CES2的體外抑制作用較強(qiáng)（IC50<10μmol·L-1），戈米辛J和戈米辛G對CES2的體外抑制作用較弱

6、（IC50>10μmol·L-1），戈米辛O在體外對CES2幾乎無抑制作用（IC50>100μmol·L-1）。2.根據(jù)中藥-藥物相互作用（HDI）風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測可知，五味子酚可能會導(dǎo)致以CES2為依賴的底物藥物在體內(nèi)的暴露水平最大發(fā)生39.7%的增幅，具有一定的HDI風(fēng)險(xiǎn)；3.五味子酚在體外對CYP3A/3A4有中到弱的抑制能力，在人體內(nèi)抑制作用較弱，而對于CYP2E1、CYP2D6及CYP2C9則幾乎無抑制作用。
　　結(jié)論：1.五味