富勒烯-環(huán)糊精-沙利度胺包合物的光動力效應(yīng)及抗血管生成作用.pdf

1、近年來腫瘤發(fā)病率有呈上升的趨勢，由于傳統(tǒng)治療方法有風險大、毒副作用強等弊端，人們積極尋找更安全有效的治療手段。光動力治療具有非侵入性、可多次安全重復(fù)使用等優(yōu)點。抗腫瘤血管生成治療以腫瘤血管內(nèi)皮細胞為作用靶點，系統(tǒng)毒性較小，不易產(chǎn)生耐藥性，與腫瘤化學藥物聯(lián)用可以起到協(xié)同效應(yīng)。納米顆粒輸送系統(tǒng)基于生物體EPR效應(yīng)或表面修飾靶向基團后，可被動或主動靶向到達腫瘤組織，起到良好的抗腫瘤作用。
　　本文旨在合成一種富勒烯-環(huán)糊精/沙利度胺包合

2、物，利用包合物中的環(huán)糊精部分增強體系的生物相容性，并包合藥物，利用富勒烯結(jié)構(gòu)光動力作用生成ROS殺死腫瘤細胞（腫瘤實質(zhì)），利用沙利度胺藥物作用殺死腫瘤血管內(nèi)皮細胞（腫瘤間質(zhì)），從而起到協(xié)同作用。采用該納米藥物載體，其潛在優(yōu)勢在于:①生物相容性好;②提高藥物溶解度，載藥率高;③具有被動靶向性。
　　本文合成了環(huán)糊精-富勒烯/沙利度胺包合物，在理化表征的基礎(chǔ)上進行了生物學應(yīng)用探討。方法與結(jié)果如下:(1)利用乙二胺加成到富勒烯碳籠上得到

3、氨基化富勒烯衍生物，馬來酸酐與β-環(huán)糊精反應(yīng)得到羧基化環(huán)糊精，將這兩者酰胺化偶聯(lián)，最后利用環(huán)糊精空腔包合沙利度胺藥物。通過紅外光譜、質(zhì)譜、紫外光譜、核磁共振等技術(shù)手段對材料結(jié)構(gòu)表征分析。結(jié)果表明成功合成了富勒烯與β-環(huán)糊精摩爾比為1∶1的復(fù)合物，并包合沙利度胺，載藥率為7.34％，該包合物具有較好的藥物緩釋能力。(2) Hela細胞與一系列梯度濃度包合物共培養(yǎng)并光照處理后:采用MTT法檢測細胞活性，載體材料無光照條件下生物相容性很好，光

4、照處理下會發(fā)生光動力反應(yīng)，而包合物無光照條件下釋放藥物導致細胞毒性，光照處理下有協(xié)同效應(yīng)對細胞毒性更強;添加不同的ROS抑制劑，用MTT法比較細胞活性的改變，L-組氨酸和NAC（兩種單線態(tài)氧清除劑）的添加顯著提高了細胞活性，鑒別出光動力反應(yīng)是TypeⅡ型為主;用流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)ROS積累量，再進一步由ABDA檢測單線態(tài)氧產(chǎn)率;用鈣黃綠素/PI雙染法做活細胞/死細胞雙重染色，觀察細胞死亡情形;通過Fura-2/AM探針檢測細胞內(nèi)Ca2

5、+濃度。結(jié)果顯示富勒烯-環(huán)糊精/沙利度胺包合物光照處理下會發(fā)生光動力作用，使細胞活性降低，ROS升高，Ca2+濃度升高。(3)通過MTT實驗、細胞劃痕實驗、Transwell侵襲實驗和體外小管形成實驗來探討包合物光照處理對人臍靜脈內(nèi)皮細胞的增殖、遷移、小管形成的抑制作用。結(jié)果表明包合物的藥物抗血管生成作用和光動力效應(yīng)協(xié)同作用，明顯抑制了HUVEC細胞體外血管生成。綜上所述，本課題合成了一種新的環(huán)糊精-富勒烯/沙利度胺包合物，具有光動力效