慢性阻塞性肺疾病大鼠al-AT和NE的表達(dá)及糖皮質(zhì)激素的治療作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(neutronphil elastase，NE)和α1-抗胰蛋白酶(alpha1 antitrypsin，al-AT)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)大鼠肺組織及肺泡灌洗液中的表達(dá)，探討NE和al-AT在COPD發(fā)病中的作用及吸入糖皮質(zhì)激素對(duì)其的影響。
　　方法：
　　1.采用煙熏法建立COPD動(dòng)物模型。將30只大鼠分為

2、三組：對(duì)照組、煙霧暴露組及布地奈德組。除對(duì)照組外，另外兩組大鼠每日在熏煙箱內(nèi)煙霧暴露，每日2次，每一次吸煙20支(1h)，持續(xù)總共4個(gè)月，在最后一個(gè)月給予布地奈德組布地奈德霧化治療。測(cè)量大鼠體重、肺功能、左右心室比值、支氣管肺泡灌洗液(bronchveolarlarage fluid，BALF)中白細(xì)胞數(shù)量及分類，并且對(duì)肺組織病理形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察。
　　2.采用ELISA法檢測(cè)BALF中NE和al-AT的蛋白表達(dá)，采用免疫組化方法對(duì)

3、大鼠肺組織al-AT和NE蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR方法(reverse transcription PCR，RT-PCR)對(duì)肺組織中al-AT mRNA和NE mRNA表達(dá)進(jìn)行測(cè)定，觀察布地奈德對(duì)al-ATmRNA和NE mRNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.三組大鼠實(shí)驗(yàn)前體重?zé)o明顯差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)三組大鼠體重有顯著差異(P<0.01)：與對(duì)照組比較煙霧暴露組大鼠體重下降(P<0.01)；

4、布地奈德組大鼠體重也有明顯下降(P<0.01)，但較煙霧暴露組體重增加(P<0.05)。大鼠肺功能檢測(cè)結(jié)果顯示Ri、Re、FEV0.3/FVC、Cdy三組之間差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.05)。煙霧暴露組與對(duì)照組比較FEV0.3/FVC、Cdy明顯下降(均P<0.01)，Re、Ri明顯升高(P<0.01，P<0.05)；與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后Re、Cdy、FEV0.3/FVC均有

5、改善(均P<0.05)，Ri雖下降但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。煙霧暴露組與對(duì)照組比較，BALF中白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分率顯著增多(均P<0.01)，淋巴百分率下降(均P<0.05)，內(nèi)襯間隔(MLI)及支氣管壁厚/外徑(bronchial wallthickness/diameter，BWT/D)顯著增加(P<0.01)，平均肺泡數(shù)(MAN)顯著降低(P<0.01)。布地奈德治療后與煙霧暴露組比較，白細(xì)胞總數(shù)下降明顯(P<0.0

6、1)，各分類細(xì)胞百分比、MAN、MLI及BWT/D無明顯改變(均P>0.05)。
　　2. ELISA試劑盒檢測(cè)三組大鼠BALF中al-AT和NE的水平。煙霧暴露組與對(duì)照組比較，BALF中al-AT的蛋白量降低(P<0.01)，而NE的蛋白水平升高(P<0.01)。布地奈德治療后與煙霧暴露組比較，al-AT的蛋白量略升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，NE的蛋白量下降(P<0.01)。
　　3.應(yīng)用免疫組化方法研究al-A

7、T和NE在肺組織中表達(dá)。與對(duì)照組比較，煙霧暴露組肺組織al-AT的表達(dá)降低(P<0.01)，NE表達(dá)升高(P<0.01)。與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后al-AT的蛋白量略升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，NE的蛋白量下降(P<0.01)。
　　4.應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)al-AT mRNA和NE mRNA在大鼠肺組織中表達(dá)。煙霧暴露組al-AT mRNA的表達(dá)較對(duì)照組降低(P<0.01)，是對(duì)照組的(0.55±0.057)倍

8、；與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后al-AT mRNA升高(P<0.05)，是對(duì)照組的(0.69±0.08)倍。煙霧暴露組NE mRNA的表達(dá)升高(P<0.01)，是對(duì)照組的(5.18±1.15)倍。與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后NE mRNA降低(P<0.05)，是對(duì)照組的(2.74±0.90)倍。
　　結(jié)論：
　　1.大鼠被動(dòng)吸煙4個(gè)月可成功建立COPD動(dòng)物模型。給予布地奈德治療后體重、肺泡內(nèi)炎性細(xì)胞、肺功能等指標(biāo)較前