青藤堿對類風濕關節(jié)炎模型小鼠BMDC表面共刺激分子CD80-CD86的影響.pdf

1、既往研究發(fā)現(xiàn)青藤堿可通過對樹突狀細胞（DC）上TLRs的調(diào)節(jié)，影響相應炎癥因子釋放，對實驗性關節(jié)炎模型動物關節(jié)的病理改變有改善作用。類風濕關節(jié)炎（RA）是一種多因素介導的自身免疫性疾病，T細胞的異?；罨赗A發(fā)病中起到了十分重要的作用。T細胞通過TCR識別抗原呈遞細胞（APC）提呈的抗原肽-MHC分子復合物而被激活，分泌炎性細胞因子活化巨噬細胞、中性粒細胞。作為一個專職的APC，刺激和調(diào)控T細胞的活化是樹突狀細胞的主要功能?；诖?，本課

2、題進一步研究青藤堿對DC成熟度及其相關細胞因子的探討，為治療類風濕關節(jié)炎提供實驗依據(jù)。
　　目的：通過體外誘導培養(yǎng)RA小鼠骨髓來源的樹突狀細胞（BMDC），觀察其不同生長階段生物學形態(tài)及刺激淋巴細胞增殖的能力；探索不同濃度的青藤堿體外作用于DC細胞，觀察其生物學活性變化、DC表面標志物CD80、CD86、CD11c及炎性因子IL-6、IL-12、INF-γ的改變，為青藤堿抗RA的臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　方法：SPF級ba

3、l/c小鼠，依據(jù)文獻進行改良后建立膠原誘導型類風濕關節(jié)炎模型（CIA），造模成功后脫頸處死小鼠，按文獻改良后進行骨髓來源的DC培養(yǎng)，第5天時加入脂多糖（LPS）刺激DC成熟，在第六天時采用流式細胞直接免疫熒光標記法對所得的細胞檢測CD11c，CD86的表達情況以鑒定DC細胞。將培養(yǎng)成熟的DC細胞分為空白組、模型組、青藤堿高、中、低劑量組、甲氨蝶呤組，各組給予不同濃度青藤堿干預24小時后，運用流式細胞技術檢測CD80、CD86、CD11c

4、的表達情況，并將細胞培養(yǎng)上清液采用elisa法檢測其IL-6、IL-12、INF-γ的表達水平。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結果：1.牛Ⅱ型膠原聯(lián)合完全弗氏佐劑對小鼠進行尾根部、腹部及足墊部注射，在35天左右誘導出RA模型；
　　2.IL-4及GM-CSF在第5天左右能夠誘導骨髓源細胞轉化為DC且DC在培養(yǎng)過程中常常處于集落狀態(tài)；
　　3.模型組DC表面CD80、CD86的表達明顯高于空白組，提

5、示RA造模過程中可能影響DC細胞表面協(xié)同刺激分子（CD80、CD86）的表達；
　　4.青藤堿干預后可下調(diào)DC細胞表面CD80、CD86的表達，提示其可抑制DC細胞的成熟；
　　5.青藤堿可降低DC細胞分泌IL-6、IL-12、IFN-γ等炎性因子，減少炎癥免疫應答。
　　結論：青藤堿通過降低DC細胞表面CD80、CD86的表達而抑制其成熟，從而抑制其抗原呈遞作用，抑制DC細胞分泌相關炎性因子，影響T細胞的活化，抑制其