大豆異黃酮調(diào)控PPARγ信號(hào)通路治療激素性股骨頭壞死.pdf

1、目的：探討大豆異黃酮調(diào)控PPARγ信號(hào)通路誘導(dǎo)BMSCs的成骨分化能力，治療激素性股骨頭壞死的效果及作用機(jī)制。
　　方法：1、采用肌注地塞米松磷酸鈉注射液的方法，建立兔早期激素性股骨頭壞死模型，隨后進(jìn)行行為觀察，6周后進(jìn)行MRI和組織學(xué)檢查。
　　2、全骨髓貼壁法分離兔BMSCs細(xì)胞，并進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定及誘導(dǎo)分化。
　　3、MMT法測(cè)定BMSCs增殖能力。
　　4、采用RT-PCR檢測(cè)Runx2，Col-1，Ost

2、eocalcin mRNA的表達(dá)。
　　5、試劑盒測(cè)定組織和細(xì)胞內(nèi)ALP和TG活性。
　　6、Western blot法檢測(cè)BMSCs中PPARγ蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、成功建立兔早期激素性股骨頭壞死模型。兔肌注地塞米松磷酸鈉注射液，6周后發(fā)現(xiàn)模型組雙側(cè)股骨頭形態(tài)欠規(guī)則，股骨頭內(nèi)可見(jiàn)斑片狀不規(guī)則異常影像，軟骨下骨缺血、壞死、囊變，骨小梁稀疏;雙側(cè)髖關(guān)節(jié)對(duì)稱，關(guān)節(jié)間隙正常;而對(duì)照組雙側(cè)股骨頭形態(tài)規(guī)則，股骨頭內(nèi)未見(jiàn)異常

3、信號(hào)，骨小梁排列正常，雙側(cè)髖關(guān)節(jié)間隙正常。模型組軟骨下骨板薄，毛細(xì)血管網(wǎng)稀疏;骨小梁變細(xì)和稀疏，部分?jǐn)嗔?骨細(xì)胞核固縮，空骨陷窩明顯增多;骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞增多、增大;紅骨髓受壓變少。對(duì)照組軟骨下骨板厚而連續(xù)，毛細(xì)血管網(wǎng)豐富;股骨頭內(nèi)骨小梁粗大，骨陷窩內(nèi)骨細(xì)胞形態(tài)正常;股骨頭骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞正常，紅細(xì)胞豐富，形態(tài)正常。
　　2、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)2天后可見(jiàn)大量圓形細(xì)胞，僅可見(jiàn)少量梭形細(xì)胞。5天后，貼壁細(xì)胞具有長(zhǎng)梭形的形態(tài)，能夠克隆

4、性增值生長(zhǎng)，細(xì)胞成菊花狀或旋渦狀形狀來(lái)排列。8-10天能夠有70-80％的融合率，細(xì)胞仍保持長(zhǎng)梭形。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞核染色深藍(lán)色。取第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行表型鑒定，流式細(xì)胞儀分析檢測(cè)結(jié)果表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原標(biāo)志CD44、CD90呈陽(yáng)性，而CD34、CD45呈陰性。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)后，可見(jiàn)明顯的鈣化結(jié)節(jié)。經(jīng)成軟骨誘導(dǎo)后，有軟骨基質(zhì)形成。
　　3、大豆異黃酮組處理8周后，兔早期激素股骨頭壞死骨組織中Runx2

5、，Col-1，OC mRNA表達(dá)較模型組升高，PPARγ mRNA表達(dá)降低，組間比較差異顯著，接近空白對(duì)照組。
　　4、大豆異黃酮促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞增殖，并有時(shí)間和劑量依賴性。20μM大豆異黃酮2、3天時(shí)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖明顯增加。
　　5、大豆異黃酮可增加骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的Runx2、Col-1和OC mRNA的表達(dá)，增加ALP的活性，降低TG活性。同時(shí)，20μM大豆異黃酮明顯抑制了PPARγ的激活。