一種新型HBsAg中高值定量試劑(CMIA法)的研制與臨床性能評價(jià).pdf

1、背景：
　　乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定量檢測在指導(dǎo)慢性乙型肝炎病人的臨床治療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前由于臨床慢性乙肝病人標(biāo)本HBsAg濃度較高，現(xiàn)有商品化試劑如羅氏、雅培等均需要稀釋才能檢測HBsAg定量水平，檢測效率較低。因此，本研究擬研制一種無需稀釋便可以檢測出大部分臨床標(biāo)本的HBsAg中高值定量試劑盒（化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法），提高臨床實(shí)驗(yàn)室對 HBsAg定量的檢測效率。
　　方法：
　　通過抗體間

2、兩兩交叉配對的方式，篩選出合適的HBsAg抗體包被磁微粒作為磁微粒試劑（M），標(biāo)記吖啶酯作為吖啶酯試劑（R2），與反應(yīng)稀釋液（R1）共同組成化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法HBsAg中高值定量試劑盒。用所研制的試劑檢測一系列陰性和陽性樣本，并以陽性樣本和陰性樣本檢測信號的比值（P/N）、試劑檢測范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬合相關(guān)系數(shù)r值等作為反應(yīng)活性的判斷依據(jù)，選擇最佳的試劑制備工藝和反應(yīng)體系，并對試劑的線性范圍、檢測限、精密度、交叉反應(yīng)等性能做評價(jià)。

3、通過進(jìn)一步檢測具有羅氏背景的臨床樣本，研究該試劑的臨床性能，評估該試劑對不同感染階段和不同基因型樣本的檢測結(jié)果與羅氏檢測結(jié)果的相關(guān)性、一致性等。
　　結(jié)果：
　　通過篩選最終選用Ab-3、Ab-4、Ab-6和Ab-8包被磁微粒，最佳包被工藝為：每mg磁微粒包被40ug抗體，包被緩沖液為0.02mol/L pH6.5 PBS,包被溫度為25℃，包被時(shí)間3h，終止時(shí)間3h；通過篩選最終選用Ab-1標(biāo)記吖啶酯，最佳標(biāo)記工藝為：每1

4、00ug原料標(biāo)記12ul的0.005 mol/L吖啶酯母液,標(biāo)記緩沖液為0.02mol/L pH8.0PBS,標(biāo)記溫度為25℃，標(biāo)記時(shí)間30min，終止時(shí)間30min；最佳反應(yīng)體系為：反應(yīng)稀釋液用量100ul,樣本加樣量20ul,磁微粒試劑和吖啶酯試劑用量均為50ul，磁微粒的使用濃度分別為0.4mg/ml，吖啶酯稀釋比例為1/200;試劑性能評估結(jié)果顯示，優(yōu)化后試劑檢測范圍為20IU/ml～100000IU/ml，最低檢測限不高于20

5、IU/ml，試劑檢測精密度小于10.0％，試劑檢測不受常規(guī)濃度的膽紅素、血脂，溶血、RF及抗凝劑的影響，且與其他病毒陽性樣本無交叉反應(yīng)；臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，該試劑與羅氏試劑檢測結(jié)果相關(guān)性好r=0.978，回歸方程為y=1.001x-0.018（y為考核試劑，x為對比試劑），對不同感染階段、不同基因型及不同濃度水平的HBsAg陽性樣本相關(guān)性一致性均好，兩試劑檢測結(jié)果的符合率為100%，Kappa值為1。
　　討論：
　　新型乙肝