阿特拉津和毒死蜱單一及聯(lián)合暴露對(duì)鯉魚熱休克蛋白影響.pdf

1、阿特拉津和毒死蜱分別為三氮苯類除草劑和有機(jī)磷類殺蟲劑。近年來，阿特拉津和毒死蜱因使用量大、殘留期長(zhǎng)、環(huán)境水體中檢出率高和具有內(nèi)分泌干擾作用等而受到廣泛關(guān)注。作為分子伴侶的熱休克蛋白，能夠在環(huán)境應(yīng)激時(shí)增加表達(dá)，修復(fù)受損蛋白，提高生物體對(duì)應(yīng)激的耐受能力。熱休克蛋白在應(yīng)激中迅速上升這一生物學(xué)特性使它成為監(jiān)測(cè)生物體應(yīng)激狀況的一種理想的生物指標(biāo)。本試驗(yàn)以鯉魚(Cyprinus carpio)為模式動(dòng)物，在制備兔抗鯉魚HSP60、HSP70和HSP

2、90多克隆抗體的基礎(chǔ)上，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量熒光PCR法與免疫印跡法檢測(cè)了阿特拉津（428、42.8和4.28μg/L）、毒死蜱（116，11.6和1.16μg/L），以及毒死蜱和阿特拉津混合物（113、11.3和1.13μg/L）暴露40 d和恢復(fù)40 d時(shí)鯉魚肝臟、腦、腎臟、鰓以及頭腎和脾臟中熱休克蛋白（HSP60、HSP70和HSP90）含量與mRNA表達(dá)。結(jié)果表明:
　　 1.利用原核表達(dá)載體表達(dá)了鯉魚HSP60、HSP70和H

3、SP90融合蛋白，將其免疫新西蘭白兔，成功制備了兔抗鯉魚HSP60、HSP70和HSP90多克隆抗體。
　　 2.阿特拉津暴露使鯉魚頭腎、脾臟和腦中HSP60的表達(dá)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，毒死蜱單獨(dú)及聯(lián)合暴露能使頭腎中HSP60的表達(dá)量逐漸上升。在腎臟中，HSP60的表達(dá)被低劑量農(nóng)藥所誘導(dǎo)，被高劑量毒死蜱及聯(lián)合組抑制。在鰓中，HSP60的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的下降趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　 3.除腎臟毒死蜱與聯(lián)合暴露，以及鰓單一與聯(lián)合暴

4、露中HSP70的表達(dá)被明顯的抑制外，其它組織在所有染毒組HSP70的表達(dá)量均增加(P＜0.05)，且毒物濃度與HSP70的表達(dá)量呈明顯的劑量依賴關(guān)系。
　　 4.在阿特拉津暴露的鯉魚腦和頭腎組織中以及毒死蜱暴露的鯉魚腦組織中，HSP90表達(dá)量在低劑量組明顯升高(P＜0.05);在毒死蜱暴露的鯉魚脾臟和頭腎組織中以及混合暴露的鯉魚脾臟中，HSP90表達(dá)量的峰值出現(xiàn)在中劑量組。在肝臟和腎臟中HSP90表達(dá)只在高劑量的農(nóng)藥暴露時(shí)增加明

5、顯。在鰓中，隨毒物濃度的升高HSP90的表達(dá)量逐漸降低(P＜0.05)。
　　 綜上所述，阿特拉津、毒死蜱以及它們的混合物能夠增加肝臟、腦、頭腎和脾臟中熱休克蛋白的表達(dá)，表明熱休克蛋白在阿特拉津和毒死蜱發(fā)揮毒性過程中起著重要作用，增加熱休克蛋白的表達(dá)是鯉魚對(duì)抗農(nóng)藥應(yīng)激的保護(hù)方式之一;而腎臟和鰓中的熱休克蛋白被抑制，提示我們?cè)谵r(nóng)藥應(yīng)激時(shí)熱休克蛋白的表達(dá)具有組織特異性。本試驗(yàn)證實(shí)了腦、肝、頭腎和脾臟中HSP70可作為阿特拉津和毒死蜱