重復經(jīng)顱磁刺激對戊四氮致癇大鼠的影響及機制研究.pdf

1、目的：研究高頻及低頻重復經(jīng)顱磁刺激對戊四氮致癇大鼠的影響，觀察磁刺激作用后大鼠癲癇發(fā)作的行為學變化并探討其可能的機制。連續(xù)2周為SD大鼠腹腔注射戊四氮以誘發(fā)癲癇，每日在腹腔藥物注射后之后分別采用低頻（0.5Hz）、高頻（10Hz）及假性重復經(jīng)顱磁刺激對各組大鼠進行重復經(jīng)顱磁刺激，觀察戊四氮誘導及不同頻率重復經(jīng)顱磁刺激作用后癲癇發(fā)作情況，通過蛋白印跡、免疫熒光等方法對相關蛋白進行檢測以探索其可能的機制。
　　方法：將正常雄性SD大鼠

2、隨機分為四組，分別設立為為對照組（Control）、假性磁刺激組（Kindled）、低頻重復經(jīng)顱磁刺激組（KrLFS）及高頻重復經(jīng)顱磁刺激組(KrHFS)。其中Kindled組、KrLFS組及KrHFS三組以40mg/kg的劑量給予腹腔注射戊四氮，注射后密切觀察并記錄大鼠有無癲癇發(fā)作及癲癇發(fā)作情況，觀察時間為1小時。經(jīng)過6小時恢復期后KrLFS、KrHFS組分別予以低頻（0.5Hz）及高頻（10Hz）經(jīng)顱磁刺激；假刺激組腹腔注射戊四氮后

3、給以只有相應聲音而無磁場作用的刺激，連續(xù)2周。各組刺激總數(shù)均為1500脈沖。對照組則在相應的時間予以腹腔注射生理鹽水。儀器采用英國Magstim Rapid2型號磁刺激儀，“8”字形線圈，刺激強度設置為為110％MT，每300個脈沖刺激之間間隔2min。每日腹腔注射戊四氮對大鼠行為學改變進行仔細觀察，尤其是癲癇發(fā)作等級，發(fā)作潛伏期等進行詳細記錄。末次注射后進行詳細的行為學觀察記錄，之后將各組大鼠處死后斷頭取腦，采用蛋白印記，實時熒光定量

4、PCR及免疫組化、TUNEL檢測等技術對大鼠海馬組織相關蛋白進行檢測，以期從行為學和分子生物學角度探討重復經(jīng)顱磁刺激對大鼠癲癇模型的的影響，對其潛在機制的進行研究。
　　結果：
　　1.腹腔注射戊四氮后給予低頻重復經(jīng)顱磁刺激刺激使大鼠致癇時間及發(fā)作潛伏期較假刺激明顯延長(P＜0.05)，高頻磁刺激作用組則較對照組明顯縮短(P＜0.05)。
　　2.低頻磁刺激作用后大鼠海馬組織內(nèi)GABAAR及GAD65表達水平較假刺激相

5、比明顯提高(P＜0.05)；高頻磁刺激作用后與假刺激作用組相比GABAAR表達無明顯差異(P>0.05)但GAD65的表達在高頻磁刺激組中較假刺激組相比明顯降低（P＜0.05）；NMDAR2A的表達水平在磁刺激組與假刺激組之間無明顯差異（P＞0.05)。
　　3.免疫組化結果提示癲癇發(fā)作（Kindled組）大鼠海馬神經(jīng)元數(shù)量與對照組相比顯著下降(P＜0.05)，致癇大鼠的低頻磁刺激使神經(jīng)元數(shù)量的減少低于假刺激大鼠（P＜0.05）。

6、Caspase-3及TUNEL檢測結果提示低頻磁刺激對癲癇發(fā)作后海馬神經(jīng)元的凋亡較假刺激相比具有抑制作用(P＜0.05)，GFAP在低頻磁刺激組的表達下降提示重復經(jīng)顱磁刺激可能抑制了致癇大鼠的星形膠質細胞增殖活化。
　　結論：戊四氮誘導SD大鼠癲癇發(fā)作后，低頻重復經(jīng)顱磁刺激抑制了癲癇的發(fā)作，高頻重復經(jīng)顱磁刺激可對戊四氮點燃的癲癇發(fā)作起到易化作用。而此種作用可能通過對中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性及抑制性神經(jīng)傳導通路中的某些受體、酶類如NMDA