右美托咪定預(yù)處理對內(nèi)毒素血癥大鼠海馬區(qū)Bcl-2、Bax表達(dá)及認(rèn)知功能的影響.pdf

1、目的:探討右美托咪定預(yù)處理對內(nèi)毒素血癥大鼠海馬區(qū)凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)及其認(rèn)知功能的影響。
　　方法:健康清潔SD雄性大鼠24只，6周齡，體重200～250g，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其分為3組(n=8):對照組（C組）、內(nèi)毒素組（E組）和右美托咪定組（D組）。E組和D組尾靜脈勻速注射LPS（Sigma公司，美國）5mg/kg，經(jīng)1min注射完畢，C組尾靜脈注射2ml生理鹽水。D組于注射LPS前30min時腹腔注射右美托咪定

2、（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司）50ug/kg;C組和E組腹腔注射生理鹽水2ml。皮下注射等張生理鹽水50ml/kg，以維持血流動力學(xué)平穩(wěn)。造模前連續(xù)6d行Morris水迷宮訓(xùn)練。造模后12h再行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即處死大鼠，取海馬組織，固定24～48h，常規(guī)脫水，石蠟包埋，制備切片。采用TUNEL法檢測神經(jīng)元凋亡情況，嚴(yán)格按試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）說明書操作。光鏡下觀察，胞核呈棕黃色為凋亡神經(jīng)元。隨機(jī)

3、選擇5個視野，計(jì)算凋亡神經(jīng)元和總神經(jīng)元，計(jì)算凋亡指數(shù)，取平均值。采用免疫組化法檢測海馬凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)水平。Bcl-2、Bax陽性細(xì)胞為胞質(zhì)有棕黃色顆粒。隨機(jī)選擇5個視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞和總細(xì)胞，計(jì)算各陽性細(xì)胞占總細(xì)胞的百分比，以此反應(yīng)目的蛋白的表達(dá)水平。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，兩兩比較使用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異

4、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1.各組大鼠Morris水迷宮比較與C組比較，E組和D組潛伏期及游泳距離延長，穿越平臺次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與E組比較，D組潛伏期和游泳距離縮短，穿越平臺次數(shù)增加(P＜0.05).2.各組細(xì)胞凋亡和AI值比較TUNEL法標(biāo)記海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡，凋亡陽性細(xì)胞核被染色為棕黃色或褐色，正常細(xì)胞被蘇木素染成藍(lán)色。結(jié)果C、E、D組凋亡率分別為[(0.34±0.12)％、(5.23±1.02)％、

5、（2.72±2.54）％];與C組比較，E組和D組AI明顯升高(P＜0.05)。與E組比較，D組AI明顯降低（P＜0.05）.3.各組大鼠Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)比較光鏡下觀察蛋白表達(dá)陽性胞質(zhì)呈棕黃色。與C組比較，E組Bcl-2表達(dá)[（8.12±1.09）％]無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），Bax表達(dá)[（11.23±1.73）％]上調(diào)，Bcl-2/Bax比值[0.73±0.12]降低(P＜0.05）;D組Bcl-2和Bax表達(dá)[（12.