PCBP-1對(duì)前列腺癌干細(xì)胞活性負(fù)性調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、第一部分TGF-β1誘導(dǎo)下前列腺癌干細(xì)胞富集化的蛋白組學(xué)研究
　　目的：
　　驗(yàn)證TGF-β1對(duì)前列腺癌干細(xì)胞富集化的作用，并探索在TGF-β1誘導(dǎo)前列腺癌干細(xì)胞富集化過(guò)程中可能的關(guān)鍵性蛋白。
　　方法：
　　LNCaP和DU145細(xì)胞通過(guò)TGF-β1誘導(dǎo)7天后，用流式細(xì)胞分析技術(shù)鑒定通過(guò)TGF-β1處理的細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)志物CD44和CD24的表達(dá)情況。并進(jìn)一步在誘導(dǎo)組和對(duì)照組中分選出CD44+/CD

2、24-細(xì)胞，分析它們干細(xì)胞標(biāo)志物CD133和α2β1Integrin的標(biāo)志物表達(dá)情況。然后對(duì)上述LNCaP的分選細(xì)胞采用質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白組學(xué)分析，篩選出差異蛋白，并用Western blot驗(yàn)證該蛋白在LNCaP和DU145細(xì)胞富集化過(guò)程中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　TGF-β1誘導(dǎo)后，LNCaP和DU145細(xì)胞中的CD44+/CD24-細(xì)胞與對(duì)照組相比呈現(xiàn)富集化。誘導(dǎo)組和對(duì)照組分別用流式分選出 CD44+/CD24-細(xì)胞，

3、發(fā)現(xiàn)前者的CD133和α2β1Integrin與后者相比呈現(xiàn)高表達(dá)（LNCaP和DU145細(xì)胞均觀察到此現(xiàn)象）。通過(guò)質(zhì)譜分析技術(shù)進(jìn)行蛋白組學(xué)分析LNCaP細(xì)胞，得到 TGF-β1誘導(dǎo)組和對(duì)照組相比有63種蛋白出現(xiàn)5倍以上的上調(diào)或者下調(diào)，其中PCBP-1下調(diào)最明顯（9.31±0.05倍）。通過(guò) Western blot驗(yàn)證了，TGF-β1誘導(dǎo)LNCaP和DU145細(xì)胞的過(guò)程中，PCBP-1蛋白表達(dá)逐步下調(diào)。
　　結(jié)論：
　　T

4、GF-β1誘導(dǎo)下，LNCaP和DU145細(xì)胞中的CD44+/CD24-細(xì)胞顯著富集化。并且這部分細(xì)胞高表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)志物CD133+/α2β1Integrin+。在上述干細(xì)胞類細(xì)胞富集化的同時(shí)，伴隨著PCBP-1的顯著下調(diào)。
　　第二部分PCBP-1對(duì)前列腺癌干細(xì)胞增殖及成瘤能力調(diào)節(jié)的研究
　　目的：
　　驗(yàn)證PCBP-1的下調(diào)是否是TGF-β1誘導(dǎo)前列腺癌干細(xì)胞富集化的關(guān)鍵因素，以及PCBP-1蛋白對(duì)前列腺癌干細(xì)胞增殖

5、及成瘤能力的影響。
　　方法：
　　通過(guò)轉(zhuǎn)染上調(diào)LNCaP和DU145細(xì)胞中的PCBP-1蛋白表達(dá)并用Western blot驗(yàn)證蛋白表達(dá)情況。獲得上調(diào)PCBP-1的上述細(xì)胞后，經(jīng)過(guò)TGF-β1誘導(dǎo)后，流式細(xì)胞分析過(guò)表達(dá)組與對(duì)照組中細(xì)胞CD44、CD24和CD133表達(dá)的情況。運(yùn)用qRT-PCR檢測(cè)PCBP-1對(duì)干細(xì)胞標(biāo)志物CD44、CD24和CD133 mRNA的影響。在過(guò)表達(dá)組與對(duì)照組中分選出CD44+/CD24-細(xì)胞，

6、行軟瓊脂克隆成球?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證干細(xì)胞增殖能力。選用上述干細(xì)胞的克隆球，檢測(cè)其在裸鼠的體外成瘤能力。
　　結(jié)果：
　　將pCMV-AC-PCBP1-GFP質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染入LNCaP和DU145細(xì)胞中，通過(guò)G418篩選后獲得穩(wěn)定的克隆，通過(guò)熒光顯微鏡和Western blot均證實(shí)PCBP-1高表達(dá)。上述細(xì)胞經(jīng)過(guò)TGF-β1誘導(dǎo)后，經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)，與對(duì)照組相比，干細(xì)胞富集化明顯降低（CD44+/CD24-/CD133+）。qRT-PCR