意蜂粗毒的生物學(xué)活性初步分析.pdf

1、意大利蜜蜂是蜜蜂的一種，在分類學(xué)上屬動(dòng)物界、節(jié)肢動(dòng)物門、昆蟲綱、膜翅目、蜜蜂總科、蜜蜂科。意大利蜜蜂（意蜂）是世界上分布最廣且被大量利用的西方蜜蜂。蜂毒是存在于蜜蜂毒囊內(nèi)的透明液體，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)包含多種有活性的物質(zhì)，包括蜂毒肽、蜂毒明肽和透明質(zhì)酸酶等。為了探究意蜂毒的物質(zhì)成分及其生物化學(xué)性質(zhì)，我們收集意蜂毒液，在粗毒水平檢測了意蜂毒對白血病細(xì)胞K562的毒害作用，發(fā)現(xiàn)對K562細(xì)胞的IC50是5.49μg/mL。隨后我們用倒置顯微鏡檢測了

2、細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化，發(fā)現(xiàn)5μg/mL的蜂毒使細(xì)胞膜受損傷，細(xì)胞邊緣模糊，而在10μg/mL的濃度下蜂毒完全破壞了癌細(xì)胞的細(xì)胞膜，細(xì)胞完全死亡。
　　本研究采用反相高效液相色譜對意蜂毒素進(jìn)行分離純化，共收集到20個(gè)峰，分別收集，真空凍干。隨后對每個(gè)組分進(jìn)行了電生理檢測，發(fā)現(xiàn)滯留時(shí)間在8min的成分可以完全抑制ND7/23細(xì)胞表達(dá)的鈉通道電流。ND7/23細(xì)胞可以表達(dá)幾種不同的鈉電流，為了進(jìn)一步研究毒素的選擇性，將Nav1.3、Nav1

3、.4、Nav1.5和Nav1.7通過HEK293T細(xì)胞異源表達(dá)，將Nav1.8通過ND7/23細(xì)胞異源表達(dá)。結(jié)果表明發(fā)現(xiàn)它完全抑制Nav1.3、Nav1.4鈉電流，抑制60％的Nav1.5電流，抑制52％的Nav1.7電流，抑制93％的Nav1.8電流，結(jié)果表明毒素對離子通道有一定的選擇性。Lycosin-Ⅰ是本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)的一種抗菌藥物，對多種臨床致病菌株都有很好的抑制作用，為了進(jìn)一步提高Lycosin-Ⅰ的抗菌活性，本實(shí)驗(yàn)室對Lyco