慢性胰腺炎發(fā)病的遺傳學(xué)基礎(chǔ)及防治研究.pdf

1、慢性胰腺炎（chronic pancreatitis，CP）是一種進(jìn)展性、不可逆的胰腺外分泌及內(nèi)分泌組織損毀性病變，最終導(dǎo)致胰腺顯著的外分泌功能損害（消化不良）和糖尿病。
　　 在西方國(guó)家，酗酒是慢性胰腺炎的最常見(jiàn)病因，占全部慢性胰腺炎的70％～90％。其他病因包括基因突變、熱帶性慢性胰腺炎，胰管梗阻，高甘油三脂血癥，高鈣血癥及自身免疫性胰腺炎等等。一部分無(wú)明確病因者稱(chēng)為特發(fā)性慢性胰腺炎（idiopathicchronic pa

2、ncreatitis，ICP）。
　　 近年來(lái)，隨著人們對(duì)于基因及環(huán)境因素的深入分析研究，特發(fā)性慢性胰腺炎的病例正逐漸減少。因此，進(jìn)行陽(yáng)離子胰蛋白酶原基因（cationic trypsinogen gene，PRSS1）、絲氨酸轉(zhuǎn)肽酶抑制劑KazAltype 1（serine protease inhibitor KazAltype 1，SPINK1）等基因的測(cè)序?qū)τ谏钊肓私馕覈?guó)慢性胰腺炎患者病因及發(fā)病機(jī)制有著重大作用。

3、　　 我們首先對(duì)慢性胰腺炎患者進(jìn)行PRSS1及SPINK1測(cè)序以尋找中國(guó)大陸漢族人群慢性胰腺炎的常見(jiàn)突變位點(diǎn)，并試圖從基因組學(xué)層面探討其發(fā)病機(jī)制。
　　 雖然Y-T Chang等人通過(guò)基因測(cè)序后的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出：早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者較晚發(fā)者有著更高的SPINK1基因突變率，但是在我們的實(shí)驗(yàn)中卻發(fā)現(xiàn)存在同一基因突變的特發(fā)性胰腺炎也有晚發(fā)的情況，并且具有同一突變的同卵雙生子之間發(fā)病時(shí)間也可相差30年以上。這些問(wèn)題僅憑之前的研究無(wú)

4、法解釋?zhuān)虼?，本研究針?duì)這一問(wèn)題進(jìn)行了深入的基因組學(xué)以及調(diào)控組學(xué)研究。
　　 我們首利用ELISA對(duì)突變進(jìn)行功能驗(yàn)證。并進(jìn)一步利用雙向差異凝膠電泳及生物信息學(xué)方法對(duì)早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者及晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者進(jìn)行血漿差異蛋白質(zhì)篩選及其相關(guān)microRNA預(yù)測(cè)，結(jié)合芯片篩選到的早發(fā)型及晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者血漿差異microRNA，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)最終揭示可能參與特發(fā)性胰腺炎早發(fā)的因素。
　　 通過(guò)TIGAR-O系統(tǒng)對(duì)中國(guó)大

5、陸漢族慢性胰腺炎患者進(jìn)行分類(lèi)，并結(jié)合基因檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：遺傳性胰腺炎符合既往國(guó)外研究結(jié)果，特發(fā)性胰腺炎的c.194+2T>C突變位點(diǎn)與中國(guó)臺(tái)灣人群相似，且突變率很高（46.6％），并傾向早發(fā)。
　　 我們通過(guò)對(duì)一對(duì)發(fā)病時(shí)間相差30年又具有c.194+2T>C突變的同卵雙生子的血漿進(jìn)行雙向差異凝膠電泳，結(jié)果表明：早發(fā)者與晚發(fā)者血漿中存在差異蛋白，其中包括血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Plasma glutathione peroxidas

6、e，GPx3），早發(fā)者血漿GPx3表達(dá)量明顯低于晚發(fā)者。我們的研究中發(fā)現(xiàn)早發(fā)型ICP血漿人8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷（8-hyohoxydeoxyguanosine，8-OHdG）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）較晚發(fā)型ICP明顯上調(diào)，并且早發(fā)型ICP與晚發(fā)型ICP較正常人群均明顯上調(diào)檢測(cè)結(jié)果表明早發(fā)者的氧化損傷程度較晚發(fā)者及正常人群均嚴(yán)重。因此我們推測(cè)：早發(fā)型ICP患者GPx3的低表達(dá)降低了其對(duì)于機(jī)體氧化損傷的保護(hù)作用，而這可

7、能是特發(fā)性胰腺炎早發(fā)的一個(gè)重要原因。
　　 miRNA芯片結(jié)果表明：早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎與晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者血漿中has-miR-453有明顯差異，早發(fā)型患者血漿has-miR-453表達(dá)量高于晚發(fā)型。通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，has-miR-453可能參與GPx3的調(diào)節(jié)。因此我們進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)，通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn)：has-miR-453的上調(diào)的確可以導(dǎo)致GPx3的低表達(dá)。
　　 基于以上結(jié)果，我們認(rèn)為：has

8、-miR-453上調(diào)，導(dǎo)致其血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶表達(dá)量降低，引發(fā)機(jī)體抗氧化保護(hù)機(jī)制的減弱，從而參與了特發(fā)性胰腺炎的早發(fā)。
　　 因此，本實(shí)驗(yàn)中，我們提出了SPINK1基因上c.194+2T>C突變并非特發(fā)性胰腺炎的早發(fā)的唯一原因，has-miR-453的上調(diào)所引發(fā)的GPx3低表達(dá)使得抗氧化保護(hù)機(jī)制降低也可能是參與ICP早發(fā)的因素之一。
　　 由于慢性胰腺炎病因復(fù)雜，發(fā)病的確切機(jī)制尚未完全闡明，因此慢性胰腺炎的治療仍是目

9、前的難題之一。慢性胰腺炎的內(nèi)鏡治療原則是以胰液流出梗阻所造成的胰管高壓和胰腺實(shí)質(zhì)壓力增高而導(dǎo)致的腹痛為前提。狹窄，結(jié)石及胰管中斷是造成慢性胰腺炎胰管梗阻的三大主要原因。以往，對(duì)于經(jīng)內(nèi)鏡逆行胰膽管造影（EncoscopicRetrograde Cholangio-Pancreatography, ERCP）失敗或無(wú)法行ERCP治療的患者來(lái)說(shuō)，只能行外科手術(shù)或保守治療。但是我們對(duì)于復(fù)雜的慢性胰腺炎的介入治療做了大膽嘗試：率先為一名胰十二指腸

10、切除術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重胰管擴(kuò)張并發(fā)癥的患者進(jìn)行了超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下經(jīng)胃壁胰管穿刺置管引流術(shù)，并取得了明顯療效。
　　 論文主要分為以下四個(gè)部分：第一章對(duì)中國(guó)大陸漢族人群慢性胰腺炎進(jìn)行了基因分析；第二章分析了中國(guó)大陸人群特發(fā)性胰腺炎的發(fā)病早晚可能與GPx3及has-miR-453的表達(dá)有關(guān)；第三章講述了我們首次嘗試在EUS引導(dǎo)下經(jīng)胃壁胰管穿刺置管引流治療Whipple術(shù)后慢性胰腺炎胰管高壓患者；最后為文獻(xiàn)綜述，介紹了慢性胰腺炎病因構(gòu)成、治療