春化過(guò)程對(duì)甘藍(lán)型油菜甲基化水平及蛋白質(zhì)影響的分析.pdf

1、大多數(shù)一年生或二年生的冬性植物（如油菜、小麥）在其種子萌動(dòng)期或營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)初期必須經(jīng)過(guò)一定時(shí)期的低溫處理（通常為4℃，2-8周）才能開(kāi)花。這一低溫處理一定時(shí)期從而促進(jìn)植物開(kāi)花的作用稱為春化作用。春化作用(vernalization)是低溫需求型植物成花所必需的發(fā)育階段，在植物成花誘導(dǎo)中，低溫是一個(gè)重要物理因子，是一種受遺傳控制的生理過(guò)程，此過(guò)程中，核酸和蛋白質(zhì)的變化已引起了許多研究者的重視，其中最初的認(rèn)識(shí)是對(duì)蛋白質(zhì)含量變化的認(rèn)識(shí)，多年來(lái)一直

2、被作為廣泛的研究和探討對(duì)象。種植在我國(guó)的90％的油菜屬冬性油菜，春化作用是調(diào)節(jié)植物由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)過(guò)度到生殖生長(zhǎng)的關(guān)鍵途徑之一，經(jīng)受一段時(shí)間的低溫處理后，這些冬油菜才能度過(guò)春化，在苗期開(kāi)花結(jié)實(shí)。DNA去甲基化已被證實(shí)在植物春化作用中起到中重要作用，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)植物在春化過(guò)程中，體內(nèi)的蛋白質(zhì)不論是種類還是數(shù)量，都會(huì)發(fā)生變化。對(duì)于春化過(guò)程中甲基化模式以及蛋白質(zhì)差異表達(dá)，目前研究主要集中于模式植物擬南芥，近年來(lái)在小麥、白菜等植物上也有報(bào)道。
　

3、　 本文以甘藍(lán)型油菜金裕油品種為實(shí)驗(yàn)材料，將甘藍(lán)型油菜在初春時(shí)以5d為間隔時(shí)間分期播種在實(shí)驗(yàn)田中，通過(guò)間隔時(shí)間的長(zhǎng)短不同來(lái)模擬油菜植株通過(guò)低溫春化作用的時(shí)間，把植物現(xiàn)蕾開(kāi)花視為油菜通過(guò)春化的關(guān)鍵點(diǎn)，對(duì)田間所種植株進(jìn)行統(tǒng)計(jì)記錄，調(diào)查各個(gè)時(shí)期通過(guò)春化的植株所占的比率;運(yùn)用甲基敏感擴(kuò)增片段多態(tài)性(MSAP)的技術(shù)，檢測(cè)各個(gè)時(shí)期樣品的全基因組甲基化模式水平，用統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，證實(shí)在春化作用下，對(duì)植株基因組DNA甲基化水平模

4、式有影響;對(duì)現(xiàn)蕾與未現(xiàn)蕾的油菜葉片分別取樣混合，采用蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)做出其蛋白質(zhì)圖譜，通過(guò)PDQuest軟件分析，比對(duì)現(xiàn)蕾與未現(xiàn)蕾油菜葉片蛋白圖譜的差異，證實(shí)在春化作用中現(xiàn)蕾植株與未現(xiàn)蕾植株蛋白數(shù)量和種類存在差異。
　　 主要結(jié)果報(bào)告如下:
　　 (1)不同播期（春化時(shí)間長(zhǎng)短不同）的甘藍(lán)型油菜，隨著播種日期的延長(zhǎng)，依次表現(xiàn)為全部現(xiàn)蕾、部分現(xiàn)蕾、未現(xiàn)蕾。與最后一期未現(xiàn)蕾的相比，植株基因組DNA甲基化水平都有所降低，但降低

5、的水平不同。植株基因組DNA甲基化水平相對(duì)越低，植株通過(guò)春化的比率相對(duì)越高;同一期里面，通過(guò)春化的植株基因組DNA甲基化水平(12.50％)略低于未通過(guò)春化的植株(13.38％)。不同播期的甘藍(lán)型油菜的DNA甲基化水平有顯著的差異，并且隨著播期的延遲DNA甲基化水平呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，說(shuō)明通過(guò)春化作用的甲基化水平要比未通過(guò)春化作用的甲基化水平低。DNA甲基化水平的變化，勢(shì)必會(huì)影響基因的表達(dá)，從而造成表型的差異。
　　 (2)使用PD