PRP對RA-FLS細(xì)胞遷移和侵襲的影響.pdf

1、目的：
　　富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)是一種含有大量血小板和各種生長因子的自體血漿。當(dāng)PPR被凝血酶、氯化鈣激活后，PRP中的α顆粒經(jīng)脫顆粒的方式，釋放出大量的生長因子，包括血小板衍生生長因子（Platelet-derived growth factor，PDGF）、轉(zhuǎn)化生長因子（Transforming growth factor-β，TGF-β）、血管內(nèi)皮生長因子(Vascular end

2、othelial growthfactor，VEGF)和胰島素樣生長因子（Insulin-like growth factor，IGF）等，而這些生長因子在細(xì)胞的增殖、分化、骨質(zhì)產(chǎn)生、軟組織愈合和膠原合成等方面起著重要的作用。
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一類以炎性細(xì)胞浸潤和滑膜增生為特點，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)的破壞和畸形的慢性自身免疫性疾病?；映衫w維細(xì)胞(Fibroblast-likesyno

3、vial cells，F(xiàn)LS)在RA的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用，RA-FLS能夠粘附細(xì)胞外基質(zhì)，分泌金屬基質(zhì)蛋白酶，遷移、侵襲至關(guān)節(jié)軟骨，造成關(guān)節(jié)的破壞。有研究報道血小板數(shù)目的增多和RA的疾病活動度相關(guān)，本文在主要目的是探討PRP對RA-FLS遷移和侵襲的影響。
　　方法：
　　1.利用凝血酶和氯化鈣活化PRP，離心后取上清用于實驗;
　　2.利用劃痕實驗、transwell細(xì)胞遷移和侵襲實驗研究PRP對RA-F

4、LS細(xì)胞遷移和侵襲的影響;
　　3.利用RA-FLS與Ⅰ型膠原粘附實驗研究PRP對RA-FLS與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,ECM)粘附的影響;
　　4.利用免疫熒光實驗觀察PRP對RA-FLS細(xì)胞肌動蛋白細(xì)胞骨架重排、絲狀和片狀偽足形成的影響;
　　5.利用RT-qPCR檢測PRP作用后RA-FLS細(xì)胞中MMPs的mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.劃痕實驗顯示PRP能夠促進RA

5、-FLS細(xì)胞的遷移;Transwell細(xì)胞遷移實驗結(jié)果顯示，相較于NC組，2％PRP和5％PRP組穿過小室的相對細(xì)胞數(shù)分別為2.02±0.78，2.59±0.90(P＜0.05)。
　　2.Transwell細(xì)胞侵襲實驗結(jié)果顯示，相較于NC組，2％ PRP和5％ PRP組的細(xì)胞穿越Matrigel屏障的相對細(xì)胞數(shù)分別為1.50±0.22，2.68±0.35(P＜0.05)。
　　3.RA-FLS細(xì)胞與Ⅰ型膠原粘附實驗顯示，相

6、較于NC組，2％PRP和5％PRP組的細(xì)胞粘附于Ⅰ型膠原的相對細(xì)胞數(shù)分別為1.50±0.27，1.87±0.62(P＜0.05)。
　　4.免疫熒光實驗結(jié)果顯示，PRP能夠促進RA-FLS細(xì)胞骨架的重排，板狀偽足和絲狀偽足增多，張力纖維減少。
　　5.RT-qPCR顯示PRP能夠促進RA-FLS上調(diào)MMP-1、MMP-3、MMP-10的mRNA的表達。
　　結(jié)論：
　　1.PRP促進RA-FLS細(xì)胞的遷移、侵襲和