黑龍江省鏈格孢屬病原菌遺傳多樣性及殺菌劑抗藥性分析.pdf

1、2007～2009年在黑龍江省各地區(qū)不同寄主植物上分離了109株鏈格孢屬病原菌,其中Alternariasolani73株、Alternaribrassicola15株、Alternariaporri21株。從分離到的A.solani,A.brassicola及A.porri菌株中各挑選一株,并利用ITS1和ITS2通用引物擴(kuò)增了3種鏈格孢屬病原菌的基因組DNA。擴(kuò)增結(jié)果顯示所測(cè)定菌株ks09-7的堿基序列與NCBI上注冊(cè)的A.Sola

2、niITS序列之間的同源性為98.35％;所測(cè)定菌株g109-2的堿基序列與NCBI上注冊(cè)的A.BrassicicolaITS序列之間的同源性為97.81％;所測(cè)定菌株zb09-10的堿基序列與NCBI上注冊(cè)的A.porriITS序列之間的同源性為98.71％。
　　 本研究利用生長(zhǎng)速率法測(cè)定了馬鈴薯早疫病菌對(duì)惡醚唑、腐霉利和戊唑醇的敏感性。惡醚唑的敏感性測(cè)定結(jié)果表明,不同年份和不同地區(qū)分離的馬鈴薯早疫病菌對(duì)惡醚唑的敏感性之間存

3、在著差異,EC50值在0.0643～9.0666μg·mL-1,最不敏感菌株(nh09-5)的EC50值是最敏感菌株(hg08-20)的141.00倍,平均值為2.5196～2.2025μg·mL-1,抗性指數(shù)低于3的馬鈴薯早疫病菌株有47個(gè),抗性指數(shù)在3～10之間的馬鈴薯早疫病病菌有3個(gè),說(shuō)明齊齊哈爾地區(qū)訥河市分離的馬鈴薯早疫病菌已有對(duì)惡醚唑產(chǎn)生抗藥性的趨勢(shì);腐霉利的敏感性測(cè)定結(jié)果表明,不同年份和不同地區(qū)分離的茄鏈格孢菌對(duì)腐霉利的敏感

4、性無(wú)顯著差異,其敏感性呈連續(xù)的單峰曲線分布,EC50值在0.3472～8.1799μg·mL-1之間,最不敏感菌株的EC50值是最敏感菌株的23.56倍,平均值為4.4457±0.6019μg·mL-1,未出現(xiàn)敏感性下降的抗藥性群體,因此可作為馬鈴薯早疫病菌對(duì)腐霉利的敏感性基線;戊唑醇的敏感性測(cè)定結(jié)果表明,不同年份分離的馬鈴薯早疫病菌對(duì)戊唑醇的敏感性之間無(wú)顯著差異,但不同地區(qū)分離的馬鈴薯早疫病菌有一定的差異,其敏感性呈連續(xù)的單峰曲線分布

5、,EC50值在3.0903～3.5613μg·mL-1之間,最不敏感菌株的EC50值是最敏感菌株的7.62倍,平均值為10.3584±1.6331μg·mL-1,未出現(xiàn)敏感性下降的抗藥性群體,因此可作為馬鈴薯早疫病菌對(duì)戊唑醇的敏感性基線?？傊?腐霉利和戊唑醇可以使用在馬鈴薯早疫病的防治上,但應(yīng)注意監(jiān)測(cè)其抗藥性的動(dòng)態(tài)變化。
　　 利用RAPD技術(shù)對(duì)分離自黑龍江省哈爾濱市、齊齊哈爾市、牡丹江市、鶴崗市、佳木斯市和加格達(dá)奇市等6個(gè)地區(qū)

6、的90株鏈格孢屬病原菌進(jìn)行了遺傳多樣性分析。從20個(gè)隨機(jī)引物中篩選出一條擴(kuò)增條帶清晰,多態(tài)性好的引物,并利用NTSYS2.0進(jìn)行鏈格孢屬病原菌的聚類分析。結(jié)果表明引物OPE-19擴(kuò)增后產(chǎn)生的各個(gè)群體間相似性系數(shù)分布在0.60～1.00。在60.8％相似性水平上可劃分為3個(gè)主要RAPD組群和8個(gè)次要RAPD組群。牡丹江市和齊齊哈爾市分離的馬鈴薯早疫病菌分別劃分為8個(gè)RAPD組群。以上結(jié)果說(shuō)明黑龍江省鏈格孢屬病原菌RAPD組群與寄主植物和分

7、離地區(qū)之間沒(méi)有相關(guān)性。
　　 利用AFLP技術(shù)對(duì)分離自黑龍江省哈爾濱、齊齊哈爾、牡丹江、鶴崗、佳木斯、加格達(dá)奇等6個(gè)地區(qū)分離的91株鏈格孢屬病原菌進(jìn)行了遺傳多樣性分析。在相似性系數(shù)為0.66時(shí)91個(gè)鏈格孢屬病原菌被分為1個(gè)主要組群和3個(gè)次要組群。在這四個(gè)組群中,第一(AG10.66)、第二(AG20.66)和第四(AG40.66)組群屬于由大孢子種組成的鏈格孢屬病原菌,而第三組群(AG30.66)絕大多數(shù)屬于由小孢子種組成的鏈格

8、孢病原菌。綜合分析上述聚類結(jié)果可得出鏈格孢屬病原菌的AFLP組群與孢子類型有一定相關(guān)性,而鏈格孢屬病原菌的AFLP組群與分離地區(qū)之間沒(méi)有相關(guān)性。在相似性系數(shù)為0.72時(shí)91個(gè)鏈格孢屬病原菌被分為2個(gè)主要組群和lO個(gè)次要組群。在這12個(gè)組群中,第一(AG10.72)、第二(AG20.72)和第三組群(AG30.72)主要由蔥鏈格孢菌組成,第四(AG40.72)、第五(AG50.72)、第六(AG60.72)、第七(AG70.72)、第八(