我國(guó)葡萄灰霉病菌對(duì)主要?dú)⒕鷦┑目顾幮詸z測(cè).pdf

1、灰葡萄孢屬病原菌（Bortytis）是世界排名第二真菌病害的病原，它具有腐生性強(qiáng)，寄主范圍十分廣泛等特點(diǎn);由灰葡萄孢引起的灰霉病不僅是葡萄生產(chǎn)田中的常見病害，也是產(chǎn)后貯藏過(guò)程中的毀滅性病害。目前，國(guó)內(nèi)外主要采用化學(xué)防治的方法來(lái)控制灰霉病，但隨著殺菌劑的長(zhǎng)時(shí)間和大劑量使用，灰霉菌已經(jīng)對(duì)多種藥劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，甚至多藥抗性，因此，本研究對(duì)山東、湖北、黑龍江、山西、云南和遼寧6個(gè)省的主要葡萄產(chǎn)區(qū)灰霉菌進(jìn)行了啶酰菌胺、多菌靈、腐霉利、咯

2、菌腈、異菌脲和嘧霉胺的抗性檢測(cè)，抑霉唑作用方式的探究，抑霉唑、福美雙與其它6種主要?dú)⒕鷦┲g的交互抗性關(guān)系，并建立了基于高通量測(cè)序技術(shù)的抗性分子檢測(cè)方法用于快速檢測(cè)葡萄灰霉病菌的抗藥性。主要研究結(jié)果如下:
　　1.2016-2017年我國(guó)葡萄灰霉病菌對(duì)主要?dú)⒕鷦〦C50的測(cè)定
　　試驗(yàn)在收集到的1494株葡萄灰霉病菌中隨機(jī)選擇120株葡萄灰霉病菌株，利用傳統(tǒng)菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定灰霉菌株對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、咯菌腈、嘧霉胺、

3、福美雙的EC50和孢子萌發(fā)法測(cè)定灰霉菌株對(duì)啶酰菌胺的EC50，結(jié)果顯示多菌靈的平均EC50最大，其對(duì)葡萄灰霉病菌的毒力最弱抗性最強(qiáng)，咯菌腈的平均EC50最小毒力最強(qiáng)。
　　2.2016-2017年我國(guó)葡萄灰霉病菌對(duì)主要?dú)⒕鷦┑目剐詸z測(cè)
　　利用傳統(tǒng)菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法對(duì)來(lái)自山東蓬萊、湖北荊州、黑龍江哈爾濱、山西太谷、云南賓川和遼寧北鎮(zhèn)這6個(gè)省的主要葡萄產(chǎn)區(qū)共1494株灰霉菌進(jìn)行了抗性檢測(cè)。結(jié)果顯示，山東蓬萊、湖北荊州、

4、云南賓川、山西太谷地區(qū)中多菌靈、嘧霉胺、腐霉利和異菌脲的防效已經(jīng)接近或完全喪失，而咯菌腈的依然較好;其次，山東蓬萊、湖北荊州、山西太谷地區(qū)葡萄灰霉病菌株全部為多抗類型，而黑龍江哈爾濱、云南太谷、遼寧北鎮(zhèn)地區(qū)葡萄灰霉病菌有單抗類型且抗性頻率較低。
　　3.抑霉唑的作用方式和抑霉唑、福美雙與其它6種主要?dú)⒕鷦┲g的交互抗性關(guān)系的探究
　　本研究探測(cè)了抑霉唑?qū)颐咕淖饔梅绞剑耙置惯?、福美雙與其它6種殺菌劑之間的交互抗性關(guān)系。試

5、驗(yàn)分別采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法測(cè)抑霉唑?qū)颐咕腅C50，研究表明菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定的平均EC50遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于孢子萌發(fā)法作用方式下測(cè)得的，因此可以得出結(jié)論:抑霉唑?qū)颐咕甑淖饔梅绞街饕且种凭z的生長(zhǎng)。將已測(cè)得的這七類主要?dú)⒕鷦┑膌gEC50進(jìn)行皮爾遜相關(guān)分析，得出抑霉唑、福美雙與多菌靈、腐霉利、異菌脲、咯菌腈、嘧霉胺、啶酰菌胺的組合之間均不存在交互抗性的關(guān)系。
　　4.葡萄灰霉病菌對(duì)主要?dú)⒕鷦┑目顾幮愿咄繙y(cè)序檢測(cè)方法的建立

6、
　　高通量測(cè)序技術(shù)與傳統(tǒng)檢測(cè)方法和其他分子檢測(cè)技術(shù)相比具有高效、靈敏、便捷、低成本等顯著優(yōu)勢(shì)，因此，本研究根據(jù)已知的葡萄灰霉病菌對(duì)主要?dú)⒕鷦┑目剐酝蛔兾稽c(diǎn)，開發(fā)了高通量測(cè)序抗性檢測(cè)技術(shù)。試驗(yàn)中探測(cè)了384株葡萄灰霉病菌株對(duì)多菌靈、腐霉利異菌脲、啶酰菌胺和MDR1（多藥抗性類型1）的抗性情況且明確了多菌靈、啶酰菌胺、腐霉利異菌脲的抗性菌株的突變位點(diǎn)的頻率。試驗(yàn)還在184株非多藥抗性灰霉菌mrr1基因上檢測(cè)出22個(gè)新的突變位點(diǎn)，推測(cè)